Dissociação Mecânica: Um Método para Obter Células Viáveis de um tecido

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Garaud et. al., Um Protocolo Simples e Rápido para Tecidos Humanos Frescos Não Enzimaticamente Dissociados para a Análise de Linfócitos Infiltrados. J. Vis. Exp. (2014).

Este vídeo descreve a dissociação não enzimática do tecido humano fresco para obter células viáveis. A técnica é utilizada para análise qualitativa e quantitativa de células positivas CD45 (linfócitos/leucócitos) presentes em diversos tecidos humanos normais e malignos.

Protocol

1. Preparação do homogeneizar tecido Os tecidos dissecados (tecido maligno e normal ressecado da sala de cirurgia) estão no laboratório de patologia por pessoal treinado para coleta imediata. Tumor, NANT (retirados da maior distância possível do tumor) e fragmentos normais de tecido são rotineiramente processados dentro de 1 – 3 horas de excisão cirúrgica em um laboratório BSL2 usando procedimentos padrão de biossegurança para tecidos humanos. Um fluxograma do protocolo é ilustrado na Figur…

Representative Results

Figura 1: Fluxograma de protocolo. Nosso procedimento para o processamento de tecidos humanos frescos e algumas abordagens analíticas que podem ser posteriormente usadas para avaliar linfócitos infiltrados em tecidos humanos são mostrados. Figura 2: Imagem manchada de H&E de uma impressão de tecido …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Materials

GentleMacs Dissociator  Miltenyi Biotec  130-093-235  BD Medimachine is somewhat equivalent
Centrifuge 5810 R  Eppendorf  or other standard table top centrifuge
Centrifuge 5417 R   Eppendorf or other standard microcentrifuge
Esco Class II A2 Biosafety Cabinet   ESCO global or other standard BSL2 hood
Inverted Microscope  Nikon eclipse TS100  or other microscope compatible for a hemacytometer
Bürker Chamber Marienfield   640210 or other standard hemacytometer
Navios Flow Cytometer  Beckman Coulter  or other flow cytometer (8-10 color recommended)
GentleMacs C-Tube    Miltenyi Biotec 130-096-344 BD Medimachine uses Filcon
Cell Culture Dish   Sarstedt 72,710 or other non-pyrogenic plasticware
Disposable Scalpel    Swann-Morton 510 or standard single use sterile scalpel
BD Cell Strainer 40 µm    Becton Dickinson 734-0002 or other non-pyrogenic plasticware
BD Falcon Tube 50 ml    Becton Dickinson 352070 or other non-pyrogenic plasticware
BD Falcon Tube 15 ml   Becton Dickinson 352097  or other non-pyrogenic plasticware
BD FACS Tube 5 ml    Becton Dickinson 352008 or other non-pyrogenic plasticware
Sterile Pasteur Pipette 5 ml    VWR 612-1685 or other non-pyrogenic plasticware
Microfuge Tube 1.5 ml    Eppendorf 7805-00 or other non-pyrogenic plasticware
X-Vivo 20    Lonza BE04-448Q serum-free medium recommended
Phosphate buffered saline    Lonza BE17-516F standard physiological PBS
Trypan blue    VWR 17942E or other vital stain

Play Video

Cite This Article
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).

View Video