Il seguente video descrive una tecnica di trasduzione per etichettare le cellule tumorali PDX (xenograft derivati dal paziente), che viene utilizzata per introdurre il lentivirus che esprime proteine verde-fluorescenti e giornalisti luciferasi nella cellula tumorale in vitro.
Protocol
1. Trasduzione di cellule tumorali derivate dalla PDX Centrifugare cellule tumorali dissociate a 300 g x 5 min e resospend in 2 ml di mezzi mammosfera. Contare le cellule vitali utilizzando l’esclusione blu tripano (cellule digerite Resuspend in tampone di lavaggio da 5 ml e contare celle vitali e non vitali utilizzando l’esclusione blu del trypan. In breve, mescolare 50 μl di cellule e 50 μl di tripano blu e contare le cellule trypan-blu escludendo le cellule usando un emocitometro). Preparare 10 m…
Representative Results
Figura 1: Monitoraggio dell’efficienza di trasduzione nelle cellule PDX dissociate. A) Cellule dissociate da PDX arricchite per cellule epiteliali umane (esaurimento Lin+) 24 ore dopo la trasduzione con particelle lentivirali pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro. B) Cellule dissociate da PDX da un esperimento separato, senza arricchimento cellulare epiteliale, 72 ore dopo la trasduzione con pHAGE-E…
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).