Hedeflenen Karaciğer Ablasyon: Transgenik Zebra Balığı Larvalarında Metronidazol ile Hepatosit Ölümünü Teşvik Etmek
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Choi T.Y., vd. Biliyer Tahrikli Karaciğer Yenilenmesini İncelemek için Zebra Balıklarında Hepatosit spesifik Ablasyon. J. Vis. Exp. (2015)
Makale, transgenik zebra balığı larvalarında metronidazol ile hepatosit ölümünü teşvik etmek için bir yöntem olan hedefe yönelik karaciğer ablasyonunu açıklar. Örnek protokol, zebra balıklarında hedeflenen karaciğer ablasyonunu üretme, manipüle etme ve değerlendirme sürecini açıklar.
Protocol
1. Embriyoların/larvaların hazırlanması 100 embriyo, 25 ml yumurta suyu ile 100 mm petri kabına aktarın. Petri kabı başına en fazla 100 embriyo bulundurun ve 28 °C’de yükseltin. Pigmentasyonu inhibe etmek için, 10 saat döllenme sonrası (hpf) önce petri kaplarına fenilthiourea (PTU) ekleyin ve embriyoları / larvaları 80 hpf’ye kadar yükseltin. PTU’nun son konsantrasyonu 0,2 mM’dir.DİkKAT: PTU toksiktir. Uygun kullanım yönergelerine uygun olarak kullanın….
Materials
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. | ||
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA |
Cite This Article
Targeted Liver Ablation: Inducing Hepatocyte Death with Metronidazole in Transgenic Zebrafish Larvae. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20181, doi: (2023).