Rompimento da cutícula: um método para coletar hemoglifos de larvas de Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Reimels, T. A. e Pfleger, C.M. Métodos para Examinar a Glândula Linfática e Hemócitos em Larvas Drosophila . J. Vis. Exp. (2016).
O hemoglifo de Drosophila serve como sangue e fluido intersticial, circulando por todo o corpo durante a larva e estágios adultos. Este vídeo descreve um protocolo para coletar hemoglifo larval a fim de quantificar as células circulantes.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Reimels e Pfleger, Métodos para Examinar a Glândula Linfática e Hemócitos em Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Concentração de Hemócitos Circulantes Para obter larvas aproximadamente do mesmo estágio de desenvolvimento para este ensaio, restringir a coleta de ovos permitindo que as fêmeas coloquem ovos por um período fixo de 2 a 6 horas. Coletar larvas em poços de prato dissecado cheios de 1x salina tampon…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| Countess Automated Cell Counter | Invitrogen | C10227 | |
| Countess cell counting chamber slides | Invitrogen | C10283 | |
| hemocytometer | Hausser Scientific | 3200 | |
| trypan blue stain | Life Technologies | T10282 |
Cite This Article
Cuticle Disruption: A Method to Collect Hemolymph from Drosophila Larvae. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20126, doi: (2023).