דרוזופילה (לא כולל) ניתוח דיסק זחל דמיון: שיטה להתבונן בפיתוח אפיתליה
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: מורימוטו, K. ו Tamori, Y. אינדוקציה ואבחון של גידולים באפיתליה דיסק דמיון Drosophila . ג’יי ויס אקספ. (2017).
כאשר מכתימים דיסקים דמיון Drosophila, לעתים קרובות ניתוח גס מבוצע שבו הדיסקים נחשפים אבל להישאר מחובר לגוף. לאחר מוכתם, הדיסקים של עניין מבודדים רכוב. פרוטוקול הדוגמה מדגים הליך עבור ניתוח דיסק דמיון כנף והרכבה.
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך מורימוטו וטמורי, אינדוקציה ואבחון של גידולים באפיתליה דיסק דמיון Drosophila, J. Vis. Exp. (2017). 1. ניתוח הזחלים לאסוף זחלים instar השלישי נודד עם מקל עץ או מלקחיים קהים, גנוטיפ אותם על ידי סמנים פלואורסצנטיים מתאימים(למשל,EGFP) תחת מיקרוס…
Materials
| Reagents | |||
| Phosphate buffered saline (PBS) | Wako | 162-19321 | |
| TritonX-100 | Wako | 168-11805 | |
| Formaldehyde | Wako | 064-00406 | |
| bovine serum albumin | Sigma | A7906 | |
| normal goat serum | Sigma | G6767 | |
| mounting medium, Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | |
| DAPI | Sigma | D9542 | |
| mouse-anti-Dlg 4F3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 4F3 anti-discs large, RRID:AB_528203 | dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 3A6B4, RRID:AB_579780 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 3B8D12, RRID:AB_579781 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 5H7B11, RRID:AB_579779 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-atubulin | Developmental Studies Hybridoma Bank | AA4.3, RRID:AB_579793 | dilute in PBTG, 1:100 |
| Alexa Fluor 546 Phalloidin | Molecular probes | A22283 | dilute in PBS, 1:40 |
| goat anti-mouse IgG antibody, Alexa Fluor 546 | Molecular probes | A11030 | dilute in PBTG, 1:400 |
| Fly strains | |||
| sd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #8609 | recombined with UAS-EGFP |
| upd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #26796 | recombined with UAS-EGFP |
| UAS-lgl-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #51247 | |
| UAS-scrib-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #105412 | |
| UAS-RasV12 | Bloomington Drosophila Stock Center | #64196 | |
| UAS-Yki3SA | Bloomington Drosophila Stock Center | #28817 | |
| hsFLP | Bloomington Drosophila Stock Center | #6 | |
| Act>CD2>GAL4 (flip-out GAL4) | Bloomington Drosophila Stock Center | #4780 | recombined with UAS-EGFP |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #5428 | X chromosome |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #6658 | third chromosome |
| UAS-Dicer2 | Bloomington Drosophila Stock Center | #24650 | second chromosome |
| UAS-Dicer2 | Bloomington Drosophila Stock Center | #24651 | third chromosome |
| vkg-GFP | Morin et al. 2001 | GFP protein trap |
Cite This Article
Drosophila Larva Imaginal Disc Dissection: A Method to Observe Developing Epithelia. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20087, doi: (2023).