دروسوفيلا تشريح القرص التصويري اليرقات: طريقة لمراقبة تطور الظهارة
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: موريموتو، ك. وتاموري، Y. التعريفي وتشخيص الأورام في Drosophila Imaginal القرص Epithelia. ج. فيس إكسب. (2017).
عند تلطيخ أقراص Drosophila التصويرية ، غالبا ما يتم إجراء تشريح خشن حيث تتعرض الأقراص ولكنها تظل متصلة بالجسم. مرة واحدة ملطخة، يتم عزل أقراص الفائدة وشنت. يوضح بروتوكول المثال إجراء تشريح القرص التصويري للجناح وتركيبه.
Protocol
هذا البروتوكول هو مقتطف من موريموتو وتاموري ، تحريض وتشخيص الأورام في Drosophila Imaginal Disc Epithelia ، J. Vis. Exp. (2017). 1. تشريح اليرقات جمع تجول اليرقات نجمة الثالثة مع عصا خشبية أو ملقط حاد، النمط الجيني لهم من قبل علامات الفلورسنت المناسبة(على سبيل المثال،EGFP)…
Materials
| Reagents | |||
| Phosphate buffered saline (PBS) | Wako | 162-19321 | |
| TritonX-100 | Wako | 168-11805 | |
| Formaldehyde | Wako | 064-00406 | |
| bovine serum albumin | Sigma | A7906 | |
| normal goat serum | Sigma | G6767 | |
| mounting medium, Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | |
| DAPI | Sigma | D9542 | |
| mouse-anti-Dlg 4F3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 4F3 anti-discs large, RRID:AB_528203 | dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 3A6B4, RRID:AB_579780 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 3B8D12, RRID:AB_579781 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 5H7B11, RRID:AB_579779 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-atubulin | Developmental Studies Hybridoma Bank | AA4.3, RRID:AB_579793 | dilute in PBTG, 1:100 |
| Alexa Fluor 546 Phalloidin | Molecular probes | A22283 | dilute in PBS, 1:40 |
| goat anti-mouse IgG antibody, Alexa Fluor 546 | Molecular probes | A11030 | dilute in PBTG, 1:400 |
| Fly strains | |||
| sd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #8609 | recombined with UAS-EGFP |
| upd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #26796 | recombined with UAS-EGFP |
| UAS-lgl-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #51247 | |
| UAS-scrib-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #105412 | |
| UAS-RasV12 | Bloomington Drosophila Stock Center | #64196 | |
| UAS-Yki3SA | Bloomington Drosophila Stock Center | #28817 | |
| hsFLP | Bloomington Drosophila Stock Center | #6 | |
| Act>CD2>GAL4 (flip-out GAL4) | Bloomington Drosophila Stock Center | #4780 | recombined with UAS-EGFP |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #5428 | X chromosome |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #6658 | third chromosome |
| UAS-Dicer2 | Bloomington Drosophila Stock Center | #24650 | second chromosome |
| UAS-Dicer2 | Bloomington Drosophila Stock Center | #24651 | third chromosome |
| vkg-GFP | Morin et al. 2001 | GFP protein trap |
Cite This Article
Drosophila Larva Imaginal Disc Dissection: A Method to Observe Developing Epithelia. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20087, doi: (2023).