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Sviluppo di ceppi di specie di Leishmania con espressione costitutiva di eGFP
1Centro de Biología Celular y Molecular de Enfermedades,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 2Departamento de Medios y Creativo,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 3Sistema Nacional de Investigación-Secretaría Nacional de Ciencia,Tecnología e Innovación (SNI-SENACYT)
Capítulos
- 00:04Introduction
- 00:27Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
- 02:39Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
- 03:26Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
- 05:00Polyclonal Selection in Culture
- 06:41Confirmation of Genomic Integration
- 07:09Cloning by Limiting Dilution
- 08:12Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
- 09:40Conclusion
Qui, descriviamo la metodologia utilizzata per generare ceppi di L. panamensis e L . donovani che esprimono il gene per eGFP come transgene integrato stabile utilizzando il sistema pLEXSY. I parassiti trasfettati sono stati clonati limitando la diluizione e i cloni con la più alta intensità di fluorescenza in entrambe le specie sono stati selezionati per un ulteriore utilizzo nei saggi di screening farmacologico.
