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렌티바이러스 매개 CRISPR/Cas9 유전자 편집을 이용한 녹아웃 근육 세포주 개발

JoVE Journal
Genética

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JoVE Journal Genética

Development of Knock-Out Muscle Cell Lines using Lentivirus-Mediated CRISPR/Cas9 Gene Editing

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렌티바이러스 매개 CRISPR/Cas9 유전자 편집을 이용한 녹아웃 근육 세포주 개발

DOI:

10.3791/64114-v

•

10:12 min

•

June 16, 2022

•

Mathilde Beaufils, Amandine Tourel, Anne Petiot, Nicole B. Halmai, Dave J. Segal, John Rendu, Isabelle Marty

¹University Grenoble Alpes, INSERM, U1216, CHU Grenoble Alpes, Grenoble Institut Neurosciences, ²Genome Center,University of California, Davis

Capítulos

00:05Introduction
00:43CRISPR Guide Design
02:03Plasmid Cloning
03:43Lentivirus Production
06:28Myoblast Transduction
07:20Functional Characterization of Edited Clones
08:53Results: Development of RYR1-Knock Out Human Muscle Cell Line
09:42Conclusion

Summary

Tadução automática

이 프로토콜은 가이드 RNA의 설계부터 녹아웃 클론의 세포 클로닝 및 특성화에 이르기까지 CRISPR/Cas9를 사용하여 녹아웃 근세포를 생성하는 방법을 설명합니다.

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Keywords: CRISPR/Cas9 Gene Editing Knock-out Muscle Cells Lentivirus IPS Cells Guide RNA PCR Agarose Gel Restriction Enzymes Plasmid Cloning

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