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JoVE Journal Imunologia e Infecção
CRISPR-Cas9-based Genome Engineering to Generate Jurkat Reporter Models for HIV-1 Infection with Selected Proviral Integration Sites
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CRISPR-Cas9-basierte Genom Engineering Jurkat Reporter Modelle für HIV-1-Infektion mit ausgewählten proviralen Integration Websites generieren

DOI:
10.3791/58572-v

•

14:27 min

•

November 14, 2018

•

, , ,
1Heinrich Pette Institute,Leibniz Institute for Experimental Virology, 2Department of Anesthesiology,University Medical Center Hamburg-Eppendorf, 3German Center for Infection Research (DZIF)

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:42Choice of Targeted Locus, Guide RNA (gRNA), and Targeting Vector Design
  • 03:08CRISPR-Cas9-based Targeting of Jurkat Cells
  • 04:36Generation of Clonal Lines and Screening for Correct Targeting
  • 07:50Screening of Single-cell Clones by Flow Cytometry and PCR
  • 11:46Results: Screening and Analysis of Single-cell Clones for Correct Reporter Integration
  • 13:16Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Wir präsentieren einen Genom engineering Workflow für die Generation der neuen in-vitro-Modelle für HIV-1-Infektion, die proviralen Integration an ausgewählten genomischen Standorten zu rekapitulieren. Ausrichtung der HIV-abgeleitete Reporter wird durch CRISPR-Cas9-vermittelten, ortsspezifische Genom Manipulation erleichtert. Detaillierte Protokolle für einzellige Klon-Generierung, Screening und richtige targeting Überprüfung stehen zur Verfügung.

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Keywords: CRISPR-Cas9Genome EngineeringJurkat Reporter ModelsHIV-1 InfectionProviral Integration SitesGene ExpressionIn-vitro ModelsGuide RNA DesignNCBI BLASTHomology ArmsJurkat T-cell Transfection

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