Summary

Retalho axial da artéria epigástrica superficial inferior para estudo dos efeitos do pré-condicionamento isquêmico em modelo de ratos

Published: January 27, 2023
doi:

Summary

Este protocolo descreve a coleta, sutura e monitorização de retalhos fasciocutâneos em ratos que permitem boa visualização e manipulação do fluxo sanguíneo através dos vasos epigástricos superficiais inferiores por meio de pinçamento e ligadura dos vasos femorais. Isso é fundamental para estudos envolvendo pré-condicionamento isquêmico.

Abstract

Os retalhos fasciocutâneos (FCF) tornaram-se o padrão-ouro para reconstrução de defeitos complexos em cirurgia plástica e reconstrutiva. Esta técnica poupadora de músculo permite transferir tecidos vascularizados para cobrir qualquer grande defeito. FCF pode ser usado como retalhos pediculados ou como retalhos livres; no entanto, na literatura, as taxas de falha para FCF pediculado e FCF livre são superiores a 5%, deixando espaço para aprimoramento dessas técnicas e maior expansão do conhecimento nessa área. O pré-condicionamento isquêmico (PI) tem sido amplamente estudado, mas os mecanismos e a otimização do regime de PI ainda precisam ser determinados. Esse fenômeno é, de fato, pouco explorado na cirurgia plástica e reconstrutiva. Neste estudo, é apresentado um modelo cirúrgico para estudar o regime de PI em um modelo de retalho fáscio-cutâneo axial de ratos, descrevendo como avaliar de forma segura e confiável os efeitos da PI na sobrevida do retalho. Este artigo descreve o procedimento cirúrgico completo, incluindo sugestões para melhorar a confiabilidade desse modelo. O objetivo é fornecer aos pesquisadores um modelo reprodutível e confiável para testar vários regimes de pré-condicionamento isquêmico e avaliar seus efeitos na sobrevida do retalho.

Introduction

A cirurgia plástica e reconstrutiva está em constante evolução. O desenvolvimento dos retalhos muscular, fasciocutâneo e perfurante tem possibilitado reconstruções de melhor qualidade e redução da morbidade. Combinando esse conhecimento anatômico aprimorado com habilidades técnicas aprimoradas, os cirurgiões reconstrutivos podem realizar transferências de retalhos livres quando os defeitos não estão próximos de nenhuma solução local. Entretanto, embora a cirurgia de retalho perfurante seja atualmente a técnica mais avançada em cirurgia reconstrutiva, a literatura relata uma taxa de falha de 5% nas transferências de retalhos livres 1,2,3 e de até 20% para a reconstrução de retalho pediculado 4,5,6. A falha parcial a total do retalho ocorre quando o pedículo do retalho está comprometido, portanto, é essencial a busca contínua de melhorias nas técnicas atuais. Um dos métodos para melhorar a sobrevida do retalho é promover sua neovascularização no leito da ferida, permitindo a perfusão por outra fonte que não o pedículo. O pré-condicionamento isquêmico (PI) foi inicialmente descrito emum modelo cardíaco7, demonstrando que um órgão exposto à isquemia controlada sobrevive em maior grau após perder seu suprimento sanguíneo primário por ser submetido à neovascularização induzida por isquemia. Vários autores têm estudado esse princípio fundamental para otimizar a sobrevida do retalho em modelos pré-clínicos e clínicos 8,9,10.

A vantagem desta técnica sobre outros métodos para melhorar a sobrevida do retalho é a sua facilidade de execução, consistindo em testes de pinça/declamp da fonte sanguínea. No modelo de ratos, autores anteriores utilizaram o retalho da artéria epigástrica superficial inferior (SIEA) para estudar a I.P. por meio do pinçamento do pedículo principal11,12,13. No entanto, vários problemas técnicos podem ser encontrados com esse modelo, e a literatura carece de protocolos bem descritos.

Portanto, este trabalho tem como objetivo fornecer aos pesquisadores uma descrição detalhada de uma técnica de captação de retalhos SIEA de ratos com dissecção ampliada dos vasos femorais para permitir estudos intravenosos em um modelo de retalho fáscio-cutâneo axial. Esse modelo mantém a integridade dos vasos epigástricos e manipula os vasos femorais, que são mais resistentes. Compartilhamos nossa experiência e ferramentas para aprimorar o estudo desse fenômeno e aumentar a replicabilidade desse procedimento.

Protocol

O Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Hospital Geral de Massachusetts aprovou o protocolo experimental (IACUC- protocolo #2022N000099). Os autores seguiram a lista de verificação de diretrizes ARRIVE (Animal Research: Reporting In Vivo Experiments) para este trabalho. Todos os animais receberam cuidados humanizados seguindo o Guia do Instituto Nacional de Saúde para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. Um total de 12 ratos Lewis machos (250-350 g, 8-10 semanas de idade) foram usados p…

Representative Results

Todos os retalhos foram viáveis no POD5, mostrando boa vascularização pelo SIEA isoladamente. A Figura 5 mostra o retalho antes e após a injeção IV de fluoresceína, mostrando vascularização completa. Figura 5: Angiofluoresceinografia intravenosa imediata (DPO0). Essa avaliação most…

Discussion

Este artigo descreve um modelo de retalho fasciocutâneo reprodutível colhido em ratos, permitindo a avaliação da I.P. Este protocolo cirúrgico passo a passo fornece aos grupos de pesquisa um modelo confiável para testar diferentes regimes de IP. Ao impedir qualquer vascularização que não seja o pedículo, esse modelo permite estudar a neovascularização do retalho a partir do leito e margem da ferida. Este estudo realizou a ligadura no DPO5, pois estudos prévios observaram a autonomização deste retalho em ra…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabalho foi financiado pelo Massachusetts General Hospital (W.G.A) e Shriners Children’s Boston (B.U, K.U, C.L.C). Y.B e I.F.v.R são financiados pelo Shriners Hospitals for Children (ID da proposta: #970280 e #857829 respectivamente).

Materials

1 mL Syringe Luer-Lok Tip BD 309628
3-0 Ethilon 18” Black Monofilament Nylon suture Ethicon ETH-663H
8-0 Ethilon 12” Black Monofilament Nylon suture Ethicon 1716G
Adson Atraumatic Forceps Aesculap Surgical Instruments BD51R
Akorn Fluorescein Injection USP 10% Single Dose Vial 5 mL  Akorn 17478025310
Betadine Solution 5% Povidone-Iodine Antiseptic Microbicide PBS Animal Health 11205
Bipolar Cords ASSI ASSI.ATK26426
Buprenorphine Hydrochloride Injection PAR Pharmaceutical 3003406C This concentration needs to be diluted for rodents.
Depilatory product – Nair Hair remover lotion Nair NC0132811
Ear tag applier World Precision Instruments NC0038715
Gauze Sponges Curity 6939
Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine  E-Z Systems EZ-190F
Isoflurane, USP Patterson Veterinary 1403-704-06
Jewelers Bipolar Forceps Non-Stick 11 cm, straight pointed tip, 0.25 mm tip diameter ASSI ASSI.BPNS11223
Lone Star elastic stays Cooper Surgical 3311-1G
Lone star Self-retaining retractor  Cooper Surgical 3304G
Metronidazole tablets USP Teva 500111-333-06
Micro spring handle scissors  AROSurgical 11.603.14
Microscope (surgical) Leica M525 F40
Microsurgical clamp applying forceps Ambler Surgical 31-906
Microsurgical clamps (x2)  Millennium Surgical  18-B1V
Microsurgical Dumont #4 forceps  Dumont Swiss made  1708-4TM-PO
Microsurgical needle holder ASSI B-14-8
Needle holder World Precision Instruments 501246
Nosecone for Anesthesia  World Precision Instruments EZ-112
Pixel analysis software GNU Image Manipulation Program v2.10 GIMP GNU Open licence
PrecisionGlide Needle 27 G BD 305109
Ragnell Scissors  Roboz Surgical RS-6015
Rimadyl (carprofen) Zoetis 10000319 This concentration needs to be diluted for rodents
Scientific Elizabethan collar (e-collar) for Rats Braintree Scientific  NC9263311
Small animal ear tag National Band & Tag Company Style 1005-1
Small Animal Heated Operating Table (Adjustable)   Peco Services Ltd 69023
Sterile towel drape Dynarex Corporation 4410
Sterile water for injection and irrigation  Hospira 0409488724-1
Surgical scrub – BD ChloraPrep Hi-Lite Orange 3 mL applicator with Sterile Solution BD 930415
UV lamp UVP UVL-56
Webcol Alcohol prep pads  Simply Medical 5110

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Citar este artigo
Berkane, Y., Alana Shamlou, A., Reyes, J., Lancia, H. H., Filz von Reiterdank, I., Bertheuil, N., Uygun, B. E., Uygun, K., Austen Jr., W. G., Cetrulo Jr., C. L., Randolph, M. A., Lellouch, A. G. The Superficial Inferior Epigastric Artery Axial Flap to Study Ischemic Preconditioning Effects in a Rat Model. J. Vis. Exp. (191), e64980, doi:10.3791/64980 (2023).

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