Cellebasert analysen er en brukte metoden å oppdage serum anti-aquaporin-4 immunglobulin G. Denne metoden kan brukes til klinisk diagnose og vitenskapelige undersøkelser av neuromyelitis optisk spektrum lidelser.
Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunglobulin G (IgG) er kjernen diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum lidelser (NMOSD). Cellebasert analysen (CBA) er en mye brukt til å oppdage anti-AQP4 IgG i humant serum med høy sensitivitet og spesifisitet. Kort, serum anti-AQP4 IgG fanges opp av AQP4-transfekterte cellen som er fast på biochip så oppdaget av et fluorescein-merkede sekundære antistoff. Fluorescens mikroskopi er benyttet for å visualisere fluorescensen og intensiteten av fluorescens vurderes ved minst to erfarne klinikere. NMOSD siste diagnosen kan gjøres basert på en kombinasjon av anti-AQP4 IgG søkeresultatene, kliniske manifestasjoner og neuroradiological funn. Ifølge tidligere studier CBA er mer følsom og spesifikk enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder, og det kan brukes til både klinisk diagnose og studier av NMOSD. Metoden har begrensninger; for eksempel mangler fortsatt internasjonal målestokk å evaluere serum anti-AQP4 IgG titers. Her er en detaljert protokoll for humant serum anti-AQP4 IgG oppdagelsen med CBA beskrevet.
Serum AQP4 IgG er en kjerne diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum lidelser (NMOSD)1. Cellebasert analysen (CBA) er en mye brukt anti-AQP4 IgG gjenkjennings-metoden med høy sensitivitet og spesifisitet. Her er en detaljert protokoll for CBA innført.
AQP4, en vann kanal protein, har seks membran-spenner enheter og to spiralformede domener rundt en vandig pore2. Anti-AQP4 IgG er involvert i patogenesen av NMOSD gjennom binding til målet AQP4, som er hovedsakelig lokalisert på endfeet av astrocyttene3. Det har vist at anti-AQP4 IgG er positive i omtrent to tredjedeler av NMOSD pasienter4. I de siste internasjonale diagnostiske kriteriene for NMOSD anses anti-AQP4 IgG å være en kjerne diagnostiske biomarkør5. I denne forbindelse er det viktig å etablere en protokoll som er pålitelig for å oppdage humant serum anti-AQP4 IgG og tilrettelegge kliniske diagnosen NMOSD.
Foreløpig er ulike anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder tilgjengelige, for eksempel CBA, vev-basert analysen, enzym knyttet immunosorbent analysen og flyt cytometri6,7. CBA benytter EU90 celler, som er transfekterte med menneskelige AQP4, å fange anti-AQP4 IgG. Fanget anti-AQP4 IgG oppdages av fluorescerende sekundære antistoffer og senere visualisert ved mikroskopi. Samler bevis har vist at CBA er mer følsom og spesifikk enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenning metoder6,7. Ifølge en meta-analyse, sensitivitet og spesifisitet av CBA ble vist å være 76% og 99%, noe som var høyere enn vev-basert og enzym knyttet immunosorbent søk6. Videre var en multicenter sammenligning av diagnostiske analyser av anti-AQP4 IgG gjennomført7. Totalt 193 studien fag fra 15 europeiske diagnostiske sentre var registrert7. Fire forskjellige metoder ble benyttet for å oppdage serum anti-AQP4 IgG7. Det ble demonstrert at CBA var mer følsom og spesifikk enn de andre metoder7. Som AQP4 uttrykkes som to store isoformene (AQP4-M1 og AQP4-M23), anti-AQP4 IgG fange cellen er transfekterte med AQP4-M1 eller AQP4-M23. Hvilken type fange cellen er imidlertid bedre fortsatt kontroversielt. En undersøkelse har støttet AQP4-M1 basert CBA8, mens andre har indikert at AQP4-M23 basert CBA er bedre7,9,10. AQP4-M23-baserte CBA kan imidlertid gi falske positive resultater på grunn av uspesifikke IgG bindende8. Jarius et al. 11 rapporterte at det var ingen signifikant forskjell i anti-AQP4 IgG deteksjon priser mellom AQP4-M1 og AQP4-M23-baserte CBAs.
I sammendraget, serum anti-AQP4 IgG er en kjerne biomarkør for NMOSD. CBA har høyere spesifisitet og følsomhet enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder. Det er fortsatt kontroversielt om AQP4-M1 – eller AQP4-M23-baserte CBA er bedre. I denne artikkelen, er en detaljert protokoll for AQP4-M1-baserte CBA beskrevet, som kan gjelde for klinisk diagnose og studier av NMOSD.
Vi har beskrevet en allment tilgjengelig metode for å oppdage anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG er nært knyttet til NMOSD, og etablere en pålitelig anti-AQP4 IgG gjenkjennings-metoden er avgjørende for den kliniske diagnosen NMOSD. Første er anti-AQP4 IgG spesifikke for NMOSD. Multippel sklerose er også en immun-mediert sykdom i sentralnervesystemet og deler mange likheter med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG er imidlertid bare positive i NMOSD13. Andre er anti-AQP4 I…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne er takknemlig for støtten fra tilskudd fra National Science Foundation i Kina (nr. 31600820), The helse og familieplanlegging kommisjonen i provinsen Jilin (nei 2016Q036), og vitenskap og teknologi planlegging prosjektet i provinsen Jilin (nr. 20180520110JH).
Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |