Rilevamento di immunoglobulina Anti-acquaporina-4 G di siero umano dall'analisi Cell-based

Siero AQP4 IgG è un biomarcatore diagnostico di nucleo per neuromielite optica spettro disturbi (NMOSD)¹. L’analisi basata sulle celle (CBA) è un metodo di rilevamento di IgG anti-AQP4 ampiamente usato con alta sensibilità e specificità. Qui, è stato introdotto un protocollo dettagliato per CBA.

AQP4, una proteina di canale di acqua, ha sei unità dimisurazione e due domini elicoidale che circonda uno acquosa²del poro. IgG anti-AQP4 è coinvolto nella patogenesi della NMOSD tramite l’associazione alla relativa destinazione AQP4, che si trova principalmente su endfeet di astrociti³. Esso ha dimostrato che le IgG anti-AQP4 è positivo in circa due terzi di NMOSD pazienti⁴. Nei più recenti criteri diagnostici internazionali per NMOSD, IgG anti-AQP4 è considerato essere un biomarcatore diagnostico core⁵. A questo proposito, è fondamentale stabilire un protocollo affidabile per rilevare siero umano IgG anti-AQP4 e facilitare la diagnosi clinica di NMOSD.

Attualmente, diversi metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4 sono disponibili, come CBA, analisi tissutali, analisi enzima-collegata dell’immunosorbente e flusso cytometry^6,7. CBA impiega celle EU90, che transfected con AQP4 umana, per catturare le IgG anti-AQP4. Le IgG anti-AQP4 catturato viene rilevata da fluorescenti anticorpi secondari e successivamente visualizzate da microscopia. Raccogliendo la prova ha dimostrato che CBA è più sensibile e specifico rispetto altri anti-AQP4 IgG rilevamento metodi^6,7. Secondo una meta-analisi, la sensibilità e la specificità del CBA sono stati indicati per essere 76% e 99%, che erano superiori di tissutali e⁶di analisi enzima-collegata dell’immunosorbente. Inoltre, un confronto multicentrico di saggi diagnostici di IgG anti-AQP4 era condotto⁷. Un totale di 193 Studio soggetti da 15 centri diagnostici europei sono stati arruolati⁷. Quattro diversi metodi sono stati utilizzati per rilevare siero anti-AQP4 IgG⁷. È stato dimostrato che la CBA era più sensibile e specifico rispetto gli altri metodi⁷. AQP4 è espressa come due isoforme principali (AQP4-M1 e AQP4-M23), delle cellule di cattura di IgG anti-AQP4 sono trasfettate con AQP4-M1 o AQP4-M23. Tuttavia, quale tipo di cella di cattura è migliore rimane discutibile. Una ricerca ha sostenuto AQP4-M1 basata CBA⁸, mentre altri hanno indicato che l’AQP4-M23 basato CBA è meglio^7,9,10. Tuttavia, basati su AQP4-M23 CBA può dare risultati falsamente positivi a causa di non specifico IgG associazione⁸. Jarius et al.. ¹¹ ha riferito che non c’era differenza significativa nei tassi di rilevamento di IgG anti-AQP4 tra AQP4-M1 ed eventuali CBA AQP4-M23-basato.

In sintesi, siero anti-AQP4 IgG è un biomarcatore di nucleo per NMOSD. CBA ha maggiore specificità e sensibilità rispetto ad altri metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4. Rimane controverso se AQP4-M1 AQP4 M23-basato o CBA è meglio. In questo articolo, è descritto un protocollo dettagliato per CBA AQP4-M1-base, che può essere applicato a diagnosi clinica e studi di NMOSD.