미토 콘 드리 아와 T 세포에서는 리소좀의 다 색 흐름 Cytometry 기반 정량화

활성화 및 T 세포의 확산 장착 성공적인 면역 반응에 중요 한 단계가 있습니다. 최근 진보 세포질 물질 대사는 개발 및 T 세포의 기능와 밀접 하 게 관련 된 것이 좋습니다. 예를 들어, naïve T 세포 산화 인 산화 (OXPHOS) 2 차 림프 기관 가운데 재순환 동안 에너지 수요를 충족 하기에 크게 의존 합니다. 활성화, naïve T 세포 과감 한 대사 프로그래밍, 호 기성 해당 분해 ATP 생산을 증가 하 고 세포 분화 및 증식 하는 동안 엄청난 대사 요구를 충족의 유도 포함 하 여 받 다. 신진 대사 요구를 통해 수행 하지 못하는 세포 apoptosis^1,2다. 신진 대사 프로그래밍 하는 동안 미토 콘 드리 아에 중요 한 역할 때문에 그들은 크게는 셀에 대 한 에너지를 공급 하는 ATP의 생산에 대 한 책임 세포 세포 미토 콘 드리 아 콘텐츠 대사 스위치 중 변동 통해 T 세포 개발 및 활성화³. 그러나, 불필요 하거나 손상 된 미토 콘 드리 아의 축적 지질, 단백질 및 DNA를 손상 하 고 결국 죽음⁴ 셀 이어질 수 초과 선생님을 생성할 수 있습니다.

과도 한 또는 손상 된 미토 콘 드리 아 대사 변경에서 발생 하는 특수 한 형태의 autophagy⁵, mitophagy로 알려진에 의해 제거 됩니다. 미토 콘 드리 아 autophagosomes에 의해 싸여 있으며 다음 성능 저하 lysosomes로 융합. 이 미토 콘 드리 아 간의 통신 닫고 리소좀 큰 관심^6,7생성 합니다. 산화 스트레스를 미토 콘 드리 아에서 파생 된 소포 (MDVs) 리소좀 인산 가수분해 효소 및 tensin 체 (PTEN) 저하에 대 한 타겟으로하는 미토 콘 드리 아를 자극 하는 예를 들어-상 상속 키 니 아 제 1 (PINK1) 유도 및 parkin (E3 유비퀴틴 리가) 종속 방식⁸. 또한 그 mitophagy 베이 지 화이트 체형 전환^9,10에 대 한 필수적입니다 발견 했다. 더 중요 한 것은, 리소좀 단지 저하 구획, 아니라 셀룰러 신호의 레 귤 레이 터 하지 않습니다. 효소 부족으로 인해 과도 한 기판 축적 lysosomal 부전 lysosomal 막 침투성을 방해 하 여 발생 하 고 캘리포니아^{2 +} 항상성¹¹에 영향을 줍니다. T 세포 기능 결함 lysosomal 산 성 리 파 제 (LAL)¹² 또는 lysosomal 대사 산물 운송업 자 녹아웃 마우스 모델¹³ 에 추가 T 세포 항상성 유지에 리소좀의 중요성을 보여주었다. 미토 콘 드리 아와 리소좀 세포 신진 대사 조절의 불리할 수 없는 부분입니다. 따라서, 세포 미토 콘 드 리아 측정 T 세포 대사 및 기능 상태를 평가 하는 중요 한 표시기 되었습니다.

일반적으로 세포 미토 콘 드리 아 또는 lysosomal 내용을 정량화 하는 데 사용 하는 분석 실험 등 immunoblot, 전자 현미경, immunofluorescent (IF) 얼룩, 미토 콘 드리 아 DNA 복사 번호^14,15, 의 PCR 분석 ¹⁶. 이러한 분석 특정 기술적인 단점 부담 immunoblot 양적 다른 샘플 및 전자 현미경 검사 법¹⁷이러한 세포 형태학 적 특징을 시각화 수 있는 경우 전체 단백질 레벨을 비교할 수 있습니다, 하는 동안. 예, 그것은 시간이 걸리는 높은 배율과 해상도와 셀 이미지의 충분 한 번호를 취득 하거나 낮은 처리량 방법으로 간주 됩니다 이러한 분석을 만드는 샘플을 수십에서 단백질의 식 수준을 비교 하. 셀 라인, 같은 동종 세포 인구에 하지만 혼합 인구의 구성 된 조직 샘플을 또한,이 분석 실험의 적용할 수만 있습니다.

그것은 또한 드문 인구, 10에서 숫자는 최소 셀의 요구 사항에 이러한 분석을 적용 하기 어려운⁶ 10⁸ 만날 수는 없습니다. 마지막으로, 셀 일반적으로 lysed 또는 호환 되지 않는 추가 정보를 추출 하는 다른 방법으로 그들을 만드는 과정 동안 고정. 전통적인 방법에 비해, 형광 기반 cytometry는 상대적으로 높은 처리량-모든 샘플 내의 셀 혼합된 셀 인구 구성의 정보를 분석 하 고 동시에 수집 된 수 있습니다. 또한, 하나의 동일한 셀에 10 개 이상의 매개 변수를 검색할 하 고 추가 분석에 대 한 원하는 고기에 따라 셀을 정렬할 수 있습니다. 반응 형광 프로브 리소좀 및 라이브 세포에서 미토 콘 드리 아를 사용 하 고 교류 cytometry^18,19에 의해 검출 될 수 있다. 이러한 세포 기관이 전용 프로브 셀 침투성 고 특정 subcellular 위치 또는 세포에 집중 될 수 있도록 physico-화학 특성. 편리 하 게,이 프로브 따라서 다 색 분석에 대 한 그들의 응용 프로그램을 사용 하면 다양 한 형광 형식에서 사용할 수 있습니다.

표면 마커 라벨 리소좀을 리소좀 또는 미토 콘 드리 아 특정 염료와 염색 법을 결합 하는 방법을 자세하게에서 설명 합니다이 프로토콜 또는 미토 콘 드리 아에서 라이브 셀. 기본 조직 및 장기는 종종 다른 유형의 세포 인구 구성에서 생성 된 샘플에 대 한 특히 유용 합니다. 연구원은 그들의 표면 마커 식으로 관심의 세포 인구를 식별 하 고 이러한 세포에서 세포 기관이 특정 염료를 통해 lysosomal 또는 미토 콘 드리 아 내용을 구체적으로 측정 수 있습니다. 여기, 우리 주요 비장 T 세포 모집단에 lysosomal 또는 미토 콘 드리 아 질량을 계산 하는 흐름 cytometric 분석의 상세한 절차를 보여 줍니다.