영상 셀 상호 작용 Tracheal 점 막에서 2 광자 Intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 인플루엔자 바이러스 감염 중

두 광자 intravital 현미경 검사 법 (2 P-IVM) 실시간 이미징 세포 세포 상호 작용의 그들의 자연 환경¹에서 발생에 대 한 효과적인 기술입니다. 이 방법의 주요 장점 중 하나는 다른 전통적인 이미징 기술을²에 비해 더 큰 견본 깊이 (1 m m 500 µ m)에서 세포질 과정의 학문을 허용 한다. 같은 시간에 두 광자 레이저에 의해 생성 된 두 개의 낮은 에너지 광자를 사용 하 여 일반적으로 이미지 수집 과정²와 관련 된 조직 사진 손상 최소화 합니다. 지난 10 년 동안 2 P IVM 여러 분야^3,,45에서 세포 세포 상호 작용의 다른 유형을 공부에 적용 되었습니다. 이 연구는 특히 면역 세포, 그들의 높은 역동성과 다른 세포와 환경에 의해 발생 하는 신호에 따라 눈에 띄는 연락처의 형성에 의해 특징 조사에 관련 된 되었습니다. 2 P-IVM 또한 병원 체 및 호스트⁶간의 상호 작용을 공부에 적용 되었습니다. 실제로, 그것은 이전 표시 되었습니다 일부 병원 체 종류와 면역 세포, 방해, 결과적으로 면역 반응⁷사이의 연락처의 기간을 변경할 수 있습니다.

기도 점 막 첫 번째 사이트는 공 수 병원 체에 대하여 면역 반응을 생성⁸입니다. 따라서, vivo에서 이 조직에서 호스트 병원 체 상호 작용의 분석은 감염 시 호스트 방어 메커니즘의 개시를 이해 하는 것 중요 합니다. 그러나, 기도의 2 P IVM 이미지 수집의 과정을 타협 하는 동물의 호흡 사이클을 제작한 유물 때문에 주로 도전 이다. 최근, 다른 외과 모델 이미징 murine 기관^9,10,,1112 및 폐^{13,14,15, 설명 되었습니다. 16}. Tracheal 2 P-IVM 모델 폐 포 2 P IVM 모델은 더 적당 한 감염의 늦은 단계를 공부 하는 동안 위의 기도에 면역 반응의 초기 단계를 시각화 하는 우수한 설치를 나타냅니다. 개발된 폐 모델 제시는 레이저의 광 침투를 제한 하 고 intrapulmonary 기도의 점 막 층을 vivo에서 ^{17 이미징에 대 한 액세스할 수 있도록 공기 채워진 폐 포의 존재와 관련 된 제한} . 반대로, 연속 상피에 의해 형성 된 기관지의 구조는 이미지 수집을 촉진 한다.

여기, 우리가 현재 인플루엔자 감염, 동물, 수술 준비와 기도의 2 P IVM 수행 하는 데 필요한 단계에 대 한 자세한 설명을 포함 하는 프로토콜. 또한, 우리는 호 중구 및 모 수석 세포 (DC), 인플루엔자 바이러스^{18,19에 대 한 방어 메커니즘의 중재자로 중요 한 역할을 재생 하는 두 개의 면역 세포 유형의 시각화에 대 한 특정 실험 설정 설명} . 마지막으로, 우리는 neutrophil DC 상호 작용을 분석 하는 절차를 설명 합니다. 이 연락처 DC 활성화 변조 표시 되었습니다 및, 그 후, 병원 균²⁰에 대 한 면역 반응에 영향을 미칠.