Summary

अंतरिक्ष और समय में तापमान में परिवर्तन के जवाब में Drosophila के प्रदर्शन को निर्धारित करने के लिए एक स्वचालित विधि

Published: October 12, 2018
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Summary

यहाँ हम स्वचालित रूप से समय और अंतरिक्ष में तेजी से और सही तापमान परिवर्तन पैदा करता है कि एक प्रोग्राम तापमान नियंत्रित क्षेत्र का उपयोग कर बदलते तापमान पर Drosophila के हरकत प्रदर्शन का निर्धारण करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं ।

Abstract

तापमान एक सर्वव्यापी पर्यावरणीय कारक है कि कैसे प्रजातियों के वितरण और व्यवहार को प्रभावित करता है । Drosophila फल मक्खियों की विभिन्न प्रजातियों उनके शारीरिक सहिष्णुता और अनुकूलन क्षमता के अनुसार तापमान को बदलने के लिए विशिष्ट प्रतिक्रियाओं है । Drosophila मक्खियों भी एक तापमान संवेदन प्रणाली है कि ectotherms में तापमान प्रसंस्करण के तंत्रिका आधार को समझने के लिए मौलिक हो गया है के अधिकारी । हम यहां एक तापमान नियंत्रित क्षेत्र है कि अस्थाई और स्थानिक नियंत्रण के साथ तेजी से और सटीक तापमान परिवर्तन की अनुमति के लिए अलग मक्खियों की प्रतिक्रिया का पता लगाने के तापमान को बदलने के लिए वर्तमान । व्यक्तिगत मक्खियों के क्षेत्र में रखा जाता है और वरीयताओं को निर्धारित करने के लिए एक ही समय में प्रतिक्रिया मानदंडों या स्थानिकी वितरित तापमान निर्धारित करने के लिए तापमान में एकरूप क्रमिक वृद्धि के रूप में पूर्व क्रमादेशित तापमान चुनौतियों, के लिए उजागर कर रहे हैं । व्यक्तियों स्वचालित रूप से ट्रैक कर रहे हैं, गति या स्थान वरीयता के ठहराव की अनुमति । इस विधि को तेजी से तापमान की एक बड़ी रेंज पर प्रतिक्रिया यों तो Drosophila या समान आकार के अंय कीड़ों में तापमान प्रदर्शन घटता निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इसके अलावा, यह आनुवंशिक अध्ययनों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है तापमान वरीयताओं और म्यूटेंट या जंगली प्रकार मक्खियों की प्रतिक्रियाओं यों तो । इस विधि थर्मल speciation और अनुकूलन के आधार को उजागर करने में मदद कर सकते हैं, साथ ही तापमान प्रसंस्करण के पीछे तंत्रिका तंत्र ।

Introduction

तापमान एक निरंतर पर्यावरणीय कारक है कि कैसे जीवों समारोह को प्रभावित करता है और1व्यवहार है । अक्षांश और ऊंचाई में मतभेद जलवायु के प्रकार में अंतर करने के लिए सीसा जीव को उजागर कर रहे हैं, जो2तापमान,3के लिए अपनी प्रतिक्रियाओं के लिए विकासवादी चयन में परिणाम । जीवों रूपात्मक के माध्यम से विभिन्न तापमान का जवाब, शारीरिक, और व्यवहार रूपांतरों कि उनके विशेष वातावरण के तहत प्रदर्शन को अधिकतम4. उदाहरण के लिए, फल मक्खी Drosophila melanogasterमें, विभिन्न क्षेत्रों से आबादी विभिन्न तापमान वरीयताओं, शरीर के आकार, विकास के समय, दीर्घायु, fecundity, और चलने के प्रदर्शन में विभिन्न तापमान2 है ,5,6,7. विभिंन मूल के मक्खियों के बीच मनाया विविधता आनुवंशिक भिंनता और प्लास्टिक जीन8,9अभिव्यक्ति द्वारा भाग में समझाया गया है । इसी तरह, विभिंन क्षेत्रों से Drosophila प्रजातियों के तापमान ढाल के बीच अलग ढंग से वितरित और चरम गर्मी और शीत परीक्षणों के प्रतिरोध में मतभेद दिखाने के10,11,12

Drosophila भी हाल ही में चुनाव के मॉडल को आनुवंशिक और तापमान धारणा13,14, 15,16,17के तंत्रिका आधार को समझने के लिए बन गया है । मोटे तौर पर, वयस्क मक्खियों में ठंड और गर्म परिधीय तापमान सेंसर के माध्यम से और मस्तिष्क में तापमान सेंसर के माध्यम से तापमान अनुभव13,14,15,16 , 17 , 18 , 19 , 20. परिधि के लिए रिसेप्टर्स गर्म तापमान एक्सप्रेस Gr28b. d16 या Pyrexia21, जबकि परिधि शीत रिसेप्टर्स Brividoद्वारा विशेषता हैं14. मस्तिष्क में, तापमान TrpA115व्यक्त न्यूरॉन्स द्वारा संसाधित किया जाता है । इन रास्ते के म्यूटेंट पर व्यवहार अध्ययन कैसे तापमान संसाधित है और तंत्र है कि विभिंन क्षेत्रों से Drosophila की आबादी के बीच बदलती में अंतर्दृष्टि दे के बारे में हमारी समझ में सुधार कर रहे हैं ।

यहाँ हम तेजी से और सटीक तापमान परिवर्तन पैदा करता है कि एक तापमान नियंत्रित क्षेत्र का वर्णन. जांचकर्ताओं पूर्व कार्यक्रम इन परिवर्तनों को, जो मानवीय हस्तक्षेप के बिना मानकीकृत और दोहराने तापमान जोड़तोड़ के लिए अनुमति देता है कर सकते हैं । मक्खियों दर्ज की गई है और एक प्रयोग के विभिंन चरणों में अपनी स्थिति और गति निर्धारित करने के लिए विशेष सॉफ्टवेयर के साथ नज़र रखी । मुख्य माप इस प्रोटोकॉल में प्रस्तुत विभिंन तापमान पर चलने की गति है, क्योंकि यह शारीरिक प्रदर्शन है कि व्यक्तिगत थर्मल अनुकूलन क्षमता5की पहचान कर सकते है की एक पारिस्थितिकी प्रासंगिक सूचकांक है । एक साथ तापमान रिसेप्टर म्यूटेंट के साथ, इस तकनीक में मदद कर सकते हैं सेलुलर और जैव रासायनिक स्तर पर थर्मल अनुकूलन के तंत्र को प्रकट.

Protocol

1. फ्लाई फूड मीडियम की तैयारी एक 2 एल ग्लास चोंच में नल के पानी की 1 एल डालो और एक चुंबकीय हलचल पट्टी जोड़ें । उबलते तापमान तक पहुँच गया है जब तक ३०० डिग्री सेल्सियस पर एक चुंबकीय गर्म थाली पर चोंच रखो ।…

Representative Results

तापमान नियंत्रित क्षेत्र (चित्र 1a) तीन तांबे टाइल जिसका तापमान व्यक्तिगत रूप से एक प्रोग्राम सर्किट के माध्यम से नियंत्रित किया जा सकता है के होते हैं । प्रत्येक तांबे टाइल प्र?…

Discussion

यहाँ हम एक स्वचालित तापमान नियंत्रित अखाड़ा प्रस्तुत किया है (चित्रा 1) कि समय और अंतरिक्ष में सटीक तापमान परिवर्तन का उत्पादन. इस विधि से न केवल पूर्व क्रमादेशित तापमान (चित्रा 2 ?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

इस काम के हिस्से में ग्रोनिंगन विश्वविद्यालय के व्यवहार और संज्ञानात्मक तंत्रिका विज्ञान कार्यक्रम और Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología से एक स्नातक छात्रवृत्ति से एक छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया था मेक्सिको से (CONACyT), Andrea को दी Soto-ेके, और समय के अध्ययन के लिए जॉन टेंपलटन फाउंडेशन से अनुदान Hedderik वान Rijn और जीन Christophe फौजों को संमानित किया । हम FlySteps ट्रैकर विकसित करने में उनकी भागीदारी के लिए पीटर Gerrit बोसमा के भी आभारी हैं ।

लिपियों TemperaturePhases, FlySteps, और FlyStepAnalysis पूरक जानकारी के रूप में और निंनलिखित अस्थाई और सार्वजनिक रूप से उपलब्ध लिंक में पाया जा सकता है:
https://dataverse.nl/privateurl.xhtml?token=c70159ad-4d92-443d-8946-974140d2cb78

Materials

Arduino Due Arduino A000062 Software RUG
Electronics Board Ruijsink Dynamic Engineering FF-Main-02-2014
Power supply Boost XP-Power 48. V 65 W ECS65US48 Set to 53 Volt
Power supply Tile Heating XP-Power 15. V 80 W VFT80US15
Power supply Cooling XP-Power 15. V 130 W ECS130U515
Peltier elements Marlow Industries RC12-4 2 Elements, controlled DC feed
Heat sink Fisher Technik LA 9/150-230V Decoupled for vibration
Temperature sensors Measurement Specialties MCD_10K3MCD1 Micro Thermistor Probe
Copper block/tiles Ruijsink Dynamic Engineering FF-CB-01-2014
Auminum ring Ruijsink Dynamic Engineering FF-RoF-02-2015
Tesa 4104 white tape 25 x 66 mm RS Components 111-2300  White conductive tape
Red LEDs Lucky Ligt ll-583vc2c-v1-4da Wavelength between 625 nm, 20 mAmp and 6 V
Warm white LED strip Ledstripkoning HQ-3528-SMD 60 LEDs per meter
Switch Power Supply Generic T-36-12
Logitech c920 Logitech Europe S.A PN960-001055
QuickTime Player Apple Computer Recording program
Tracking analysis software R Packages: pacman
Tracking analysis software MATLAB
Thermal Imaging FLIR T400sc
Graphs and Statisticts Software Graph Pad Prism
Sigmacote Sigma-Aldrich SL2-100ML Siliconising agent
Fly rearing bottles Flystuff 32-130 6oz Drosophila stock bottle
Flypad Flystuff 59-114
Fly rearing vials Dominique Dutscher 789008 Drosophila tubes narrow 25×95 mm
Incubator Sanyo MIR-154
Magnetic hot plate Heidolph 505-20000-00 MR Hei-Standard
Agar Caldic Ingredients B.V. 010001.26.0
Glucose Gezond&wel 1019155 Dextrose/Druivensuiker
Sucrose Van Gilse Granulated sugar
Cornmeal Flystuff 62-100
Wheat germ Gezond&wel 1017683
Soy flour Flystuff 62-115
Molasses Flystuff 62-117
Active dry yeast Red Star
Tegosept Flystuff 20-258 100%

Referências

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Citar este artigo
Soto-Padilla, A., Ruijsink, R., Span, M., van Rijn, H., Billeter, J. An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time. J. Vis. Exp. (140), e58350, doi:10.3791/58350 (2018).

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