Summary

تجلط الوريد العميق الناجم عن ركود في الفئران التي يرصدها الموجات فوق الصوتية عالية التردد

Published: April 13, 2018
doi:

Summary

ويصف هذا البروتوكول الخطوات اللازمة للحصول على تجلط وريدي باستخدام نموذج ركود. وبالإضافة إلى ذلك، نحن نستخدم أسلوب غير الغازية لقياس تكوين خثرة والقرار على مر الزمن.

Abstract

تجلط وريدي حالة شائعة تؤثر على 1-2% السكان، مع الإصابة سنوية 1 في 500. تجلط وريدي يمكن أن يؤدي إلى الوفاة عن طريق الانسداد الرئوي أو النتائج في متلازمة ما بعد الخثاريه، تتميز بالألم المزمن في الساق وتورم وتقرح، أو ارتفاع ضغط الدم الرئوي المزمن الناتج في كبيرة المزمن الرئوي الحل الوسط. هذا هو أكثر الأمراض القلبية الوعائية بعد احتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية، وهو تحد سريرية لجميع التخصصات الطبية، كما أنها تؤدي إلى تعقيد مسار اضطرابات أخرى مثل السرطان والأمراض الجهازية، والجراحة، والصدمة الكبرى.

نماذج تجريبية ضرورية لدراسة هذه الآليات. نموذج ركود الحث على حجم خثرة متسقة وكمية قابلة للقياس الكمي من خثرة. ومع ذلك، من الضروري سد الفروع الجانبية الأجوف فينا أدنى لتجنب التقلبات في أحجام خثرة وأي تفسير بيانات خاطئة بشكل منهجي. قمنا بتطوير تقنية غير الغازية لقياس حجم خثرة باستخدام الموجات فوق الصوتية. باستخدام هذا الأسلوب، يمكننا تقييم التنمية خثرة والقرار مع مرور الوقت في نفس الحيوان. يحد هذا النهج عدد الفئران المطلوبة للتحديد الكمي ليتمشى مع مبدأ الاستبدال، والحد، وصقل للحيوانات في البحوث تجلط وريدي. لقد أظهرنا أن الحصول على الوزن خثرة والتحليل النسيجي لربط حجم خثرة بالقياس بالموجات فوق الصوتية. ولذلك، توضح الدراسة الحالية للحث على تجلط الوريد العميق في الفئران باستخدام نموذج ركود أدنى الوريد الأجوف وكيفية رصد استخدام الموجات فوق الصوتية عالية التردد.

Introduction

الجلطات الوريدية (إعطاؤهم)، التي تتألف من تجلط وريدي عميق (DVT)، والانسداد الرئوي، هو السبب الرئيسي الثالث للوفاة القلبية الوعائية بعد احتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية. أنها حالة شائعة تؤثر على 1-2% السكان، مع الإصابة سنوية 1 في 5001. إعطاؤهم يمكن أن يؤدي إلى: 1) الموت عن طريق الانسداد الرئوي؛ 2) متلازمة بعد انتهاء الخثاريه، تتميز بالألم المزمن في الساق وتورم وتقرح؛ أو 3) ارتفاع ضغط الدم الرئوي المزمن أدى كبير وسط الجهاز التنفسي المزمنة. إعطاؤهم هو مرض متعدد العوامل، وقد ينتج عن ركود تدفق الدم، تلف جدران الأوعية، و/أو الدول هايبركواجولابل بسبب حدوث اضطراب في التوازن بين النظم فيبرينوليتيك، وتخثر الدم كما قد وصفت قبل ما يزيد على مائة عام من سندربربيركورس ويعرف باسم الثالوث سندربربيركورس.

لأنه في معظم الحالات من المستحيل الحصول على العينات دفت البشرية، قد طور الباحثون نماذج حيوانية تجريبية من دفت. وقد استخدمت العديد من الحيوانات بما فيها الجرذان2والماوس3، الأرانب4، خنزير5، الكلب6والرئيسيات غير البشرية7 . ويمكن أن يكون محوره وراثيا الفئران الحيوان الأكثر استخداماً لدراسة دفت. ومع ذلك، كما هو الحال في جميع الحيوانات، لا يلاحظ دفت عفوية في الفئران. وهكذا، تستخدم التغيرات الفيزيائية أو الكيميائية لجدار الوريد لخلق تجلط الدم في الفئران. وقد استخدمنا نموذج كلوريد الحديد سابقا للحث على تجلط الدم في الأجوف فينا أدنى (IVC) من الفئران8،،من910. هذا النموذج يتميز بإنتاج موثوق الجلطات الانسداد في غضون دقائق ويمكن استخدامها للتحقيق في دور الأدوية المضادة الصفيحات والمضادة تخثر خلال دفت الحاد. ومع ذلك، وإجراء المحطة طرفية. وهكذا، لدراسة دفت الحادة والمزمنة، يعتبر هذا النموذج ركود أكثر ملاءمة. في هذا النموذج، يتم تكوين خثرة الناجمة عن انقطاع تدفق الدم في IVC، أحد العوامل في ثالوث سندربربيركورس للتنمية دفت كاملة. يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة تشكيل دفت والقرار، الذي ميزة مقارنة ب النموذج3 فيكل11.

قمنا بتطوير أسلوب غير الغازية لمتابعة تكوين خثرة والقرار على مر الزمن باستخدام نظام مايكرو-التصوير بالموجات فوق الصوتية عالية التردد12. قد أثبتنا سابقا أن قياس تجلط وريدي بالموجات فوق الصوتية يرتبط ارتباطاً إيجابيا بالجلطات حصل مرضية. وقد أكدنا في اثنين من الدراسات اللاحقة أن القياسات التي تم الحصول عليها مع ربط الموجات فوق الصوتية مع الوزن خثرة ومنطقة خثرة كمياً قبل9،هيستوتشيميستري10. الأهم من ذلك، لقد أظهرنا أن الموجات فوق الصوتية عالية التردد يمكن استخدامها لرصد تشكيل تجلط وريدي عميق في12من الفئران. قد تستعمل أيضا لتحديد القرار خثرة بطريقة غير الغازية.

هنا، ونحن سوف تصف البروتوكول الذي يسمح تكوين خثرة باستخدام نموذج الماوس تجلط الدم الناجم عن ركود، وكيف يمكن رصد تكوين خثرة غير إينفاسيفيلي مع مرور الوقت باستخدام الموجات فوق الصوتية عالية التردد.

Protocol

ووافق جميع إجراءات كندا “الحيوان رعاية اللجنة ماكغيل جامعة مونتريال”، ومراقبة الجودة، المؤسسية. يتم سرد كافة المعدات المطلوبة في الجدول أنا. 1-الفاري (C57BL/6J) IVC ركود البروتوكول إعداد عملية جراحيةملاحظة: هذا عملية جراحية في البقاء على قيد الحياة وذلك الأسلوب ا…

Representative Results

نموذج تجلط وريدي ركود في النموذج، وركود تم تخديره من الفئران، وشق لفضح الأجوف فينا أدنى (IVC). يتم إجراء الشق الجانب الأيمن أو الأيسر للماوس بدلاً من فتح خط الوسط البطن بطريقة لن يتدخل في التحقيق بالموجات فوق الصوتية. عضلات البطن و?…

Discussion

وهناك العديد من الخطوات الحاسمة لتكوين خثرة وريدية ناجحة باستخدام نموذج ركود. التعريفي تجلط الوريد أكثر صعوبة في الفئران القديمة بسبب تراكم الدهون المحيطة أدنى الوريد الأجوف والشريان الاورطي. ومن الناحية المثالية، ينبغي أن تكون الفئران تمر بهذا الإجراء 8-10 أسابيع من العمر. وينبغي إيلاء ع…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل بمنحه من القلب ومؤسسة كندا السكتة الدماغية، و “موريس” و “مؤسسة عائلة فاينمان بيلا”. المؤلف يود أن يشكر “ميشو فيرونيك” لها المساعدة التقنية مع نظام التصوير بالموجات فوق الصوتية VEVO770.

Materials

6-0 perma-hand silk suture Ethicon 706G
Surgical Scissors Fine Science Tools 20830-00
Suture tying forceps Fine Science Tools 20830-00
blunt forceps (straight and curved) Fine Science Tools 20830-00
Needle Driver Fine Science Tools 13002-10
Moria Spring Scissors Fine Science Tools 15396-00
1ml syringes BD Biosciences
26G needles Becton Dickinson & Co.
VEVO 770 High Resolution Imaging System Visualsonics No longer sold
SR Buprenorphine ZooPharm Given to LDI by Vet
Surgery Microscope Leica Leica M651
Systan eye oinment Alcon 288/28062-0
2×2 sterile Gauze CDMV #104148
Cotton Tip Applicators from JGH
Transpore hypoallergenic surgical tape CDMV #7411
Ultrasound gel (Aquasonic-100) Dufort & Lavigne #AKEN4061
Incubator From JGH
Isoflurane Dispomed
Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment Dispomed
Hair remover Nair
Water heated hard pad Braintree Scientific, Inc. #HHP-2
Gaymar heater water pump TP500 MATVET Inc. #R-500305
Infra-red heating lamp electrimat inc. #1R175R-PAR
Mouse rectal temperature prope emkaTECHNOLOGIES
Sterile water From JGH

Referências

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
  3. Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
  4. Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
  5. Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
  6. Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
  7. Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
  8. Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
  9. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
  10. Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
  11. Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
  12. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
  13. Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
  14. Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
  15. Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
  16. Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
  17. Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).

Play Video

Citar este artigo
Rys, R. N., Blostein, M. D., Lemarié, C. A. Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography. J. Vis. Exp. (134), e57392, doi:10.3791/57392 (2018).

View Video