यहां हम एक ९६ में खिंचाव चोट के विट्रो मॉडल में एक मानव के लिए एक विधि वर्तमान एक टाइमस्केल पर अच्छी तरह से प्रारूप आघात प्रभाव के लिए प्रासंगिक । इस खिंचाव प्लेटों के निर्माण के लिए तरीके शामिल हैं, यांत्रिक अपमान, संवर्धन और घायल कोशिकाओं, इमेजिंग, और उच्च सामग्री विश्लेषण चोट यों तो बढ़ाता है ।
दर्दनाक मस्तिष्क चोट (TBI) उच्च रुग्णता और मृत्यु दर के साथ एक प्रमुख नैदानिक चुनौती है । पूर्व के दशकों के बावजूद नैदानिक अनुसंधान, TBI के लिए कोई सिद्ध चिकित्सा विकसित किया गया है । यह कागज पूर्व नैदानिक neurotrauma मौजूदा पूर्व नैदानिक मॉडल के पूरक के लिए इरादा अनुसंधान के लिए एक उपंयास विधि प्रस्तुत करता है । यह मानव प्रेरित pluripotent स्टेम कोशिका व्युत्पंन न्यूरॉन्स (hiPSCNs) के उपयोग के माध्यम से मानव pathophysiology का परिचय । यह लोड हो रहा है नाड़ी अवधि नैदानिक बंद सिर प्रभाव चोट की लोडिंग अवधि के समान । यह एक ९६-अच्छी तरह से प्रारूप है कि उच्च प्रवाह प्रयोगों की सुविधा और महंगी कोशिकाओं और संस्कृति रिएजेंट के कुशल उपयोग करता है रोजगार । सिलिकॉन झिल्ली पहले neurotoxic खरीद बहुलक को हटाने और फिर वाणिज्यिक ९६ के लिए बंधुआ-अच्छी तरह से प्लेट निकायों को बढ़ाकर ९६-अच्छी तरह से प्लेटें बनाने के लिए इलाज कर रहे हैं । एक कस्टम-निर्मित डिवाइस के नीचे से कुछ या सभी अच्छी तरह से नीचे से इंडेंट के लिए प्रयोग किया जाता है, equibiaxial यांत्रिक तनाव उत्प्रेरण कि यांत्रिक कुओं में संस्कृति में कोशिकाओं को घायल कर । इंडेंटेशन गहराई और यांत्रिक तनाव के बीच संबंध इंडेंट के दौरान अच्छी तरह से नीचे की उच्च गति वीडियोग्राफी का उपयोग empirically निर्धारित होता है । hiPSCNs सहित कोशिकाओं, पारंपरिक कोशिका संस्कृति प्रोटोकॉल के संशोधित संस्करण का उपयोग कर इन सिलिकॉन झिल्ली पर प्रसंस्कृत किया जा सकता है. सेल संस्कृतियों के फ्लोरोसेंट सूक्ष्म छवियों का अधिग्रहण कर रहे है और एक अर्द्ध स्वचालित फैशन में चोट के बाद विश्लेषण के लिए एक अच्छी तरह से चोट के स्तर को बढ़ाता है । प्रस्तुत मॉडल hiPSCNs के लिए अनुकूलित है, लेकिन सकता है सिद्धांत में अंय प्रकार के सेल के लिए लागू किया जाएगा ।
TBI मृत्यु और संयुक्त राज्य अमेरिका में रुग्णता का एक प्रमुख कारण है, के आसपास के कारण ५२,००० मौतें और २७५,००० अस्पताल में हर साल1। TBI के लिए उंमीदवार चिकित्सीय चिकित्सा के 30 से अधिक नैदानिक परीक्षणों को एकल सफलता2के बिना आयोजित किया गया है । इस वर्दी विफलता पता चलता है कि मानव विशिष्ट प्रक्रियाओं आमतौर पर इस्तेमाल पूर्व नैदानिक कुतर मॉडल में मनाया pathophysiology से मानव TBI अलग ।
hiPSCNs के आगमन में एक मानव में neurotrauma अध्ययन करने का अवसर बनाया गया है इन विट्रो मॉडल । hiPSCN आधारित मॉडल के साथ दवा स्क्रीनिंग परिणाम है कि अधिक नैदानिक सफलता के मॉडल से कुतर कोशिकाओं को रोजगार की भविष्यवाणी कर रहे है उद्धार कर सकते हैं । इसके अलावा, hiPSCNs आनुवंशिक रूप से अलग और पैथोलॉजी3पर व्यक्तिगत मानव आनुवंशिक वेरिएंट के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए हेरफेर किया जा सकता है ।
इस पांडुलिपि में वर्णित विधि hiPSCN आधारित रोग मॉडलिंग के अनूठे फायदों को neurotrauma में लाने के लिए बनाया गया है. इन विट्रो में खिंचाव चोट neurotrauma के मॉडल अच्छी तरह से स्थापित कर रहे हैं4,5,6 प्राथमिक के साथ कुतर कोशिकाओं और मानव तंत्रिका कैंसर सेल लाइनों. इन मॉडलों के अधिकांश सांस एक सिलिकॉन झिल्ली लदान द्वारा खिंचाव उत्पंन करते हैं । इस दृष्टिकोण एक भी अच्छी तरह से प्रारूप में प्रभावी है, लेकिन मुश्किल साबित कर दिया है एक बहु अच्छी तरह से प्रारूप7तक पैमाने पर । नतीजतन, वहां कभी नहीं किया गया है एक उच्च प्रवाह स्क्रीन एजेंटों के लिए खिंचाव घायल ंयूरॉंस के इलाज के लिए ।
इस मॉडल में, झिल्ली एक कठोर फ्रॉम के साथ नीचे से इंडेंट के कारण फैला. इस प्रकिया बार में एकल अच्छी तरह से सिस्टम8,9,10में इन विट्रो में नैदानिक रूप से प्रासंगिक विकृति उत्पंन करने के लिए दिखाया गया है । हमारे हाल के काम से पता चला है कि यह आसानी से एक ९६-अच्छी तरह से प्रारूप को तराजू जबकि मिलीसेकंड11, जो बंद सिर प्रभाव घटनाओं12,13के समय डोमेन है के दसियों के आदेश पर पल्स अवधि को बनाए रखने ।
संक्षेप में, इस में इन विट्रो चोट मॉडल के प्रमुख लाभ ९६-well प्रारूप, hiPSCNs का उपयोग कर रहे हैं, और अपमान के नैदानिक प्रासंगिक समय डोमेन ।
इस मॉडल में एक सुसंगत, biofidelic phenotype प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण एक सुसंगत biofidelic यांत्रिक अपमान लागू है । यह मॉडल पल्स अवधि के रूप में कम के रूप में 10-15 ms, जो मानव सिर प्रभावों के लिए पल्स अवधि के लिए समान है cadaveric प्रयोगों12,13के अनुसार उत्पन्न कर सकते हैं. इस अपमान की निरंतरता इंडेंटर ब्लॉक और इंडेंटर्स के अनुरूप स्नेहन के साथ प्लेट के संरेखण पर निर्भर करता है । जब इंडेंटर ब्लॉक अच्छी तरह संरेखित होता है, तो पंक्तियों या स्तंभों में लागू किए गए दबाव में कोई रुझान नहीं होता है (चित्र 2c) । स्नेहक की एक पतली परत आमतौर पर एक मोटी परत की तुलना में कम घर्षण बनाता है, और चिपचिपा तेल की सिफारिश नहीं कर रहे है क्योंकि वे और सिलिकॉन बेईमानी माइक्रोस्कोपी के दौरान प्रकाश के पारित होने बाधा । वास्तविक अवस्था विस्थापन आयाम निर्धारित विस्थापन आयाम के काफी कम गिर सकता है जब कई इंडेंटर का उपयोग किया जाता है, और निर्धारित चरण विस्थापन आयाम बड़ा (> 3 मिमी) है । हालांकि, जबकि वास्तविक विस्थापन बड़े आयाम पर निर्धारित विस्थापन से कम है, यह दोहराई (आंकड़ा बी b) रहता है । इसलिए, बड़े, वास्तविक विस्थापन आयाम मज़बूती से वांछित मूल्य से अधिक में एक निर्धारित मूल्य दर्ज करके प्राप्त किया जा सकता है । विस्थापन आयाम मामलों केवल क्योंकि यह पीक झिल्ली तनाव है, जो सीधे यांत्रिक अपमान है कि विकृति लाती उपाय के लिए एक आसानी से दर्ज प्रॉक्सी है । इसलिए, चरण विस्थापन से झिल्ली तनाव निर्धारित करने के लिए वर्णित प्रक्रिया महत्वपूर्ण है । इस प्रक्रिया को दोहराया जाना चाहिए अगर कोई बड़ा परिवर्तन प्रणाली है कि प्लेट और फ्रॉम के बीच बातचीत को प्रभावित करने के लिए किया जाता है, उदाहरण के लिए अगर अलग व्यास फ्रॉम, विभिन्न फ्रॉम सामग्री या कोटिंग्स, या सिलिकॉन के विभिन्न प्रकार तली प्लेट इस्तेमाल कर रहे हैं । इंडेंटर ब्लॉक करने और शून्य स्थिति निर्धारित करने की प्रक्रिया को प्रत्येक प्रयोग के प्रारंभ में दोहराया जाना चाहिए. खींच डिवाइस के एक योजनाबद्ध चित्रा 1में दिखाया गया है. उपकरण को पुन: पेश करने के लिए आवश्यक सीएडी मॉडल पूरक सामग्री के रूप में प्रदान की जाती हैं-‘ चोट डिवाइस-पूर्ण विधानसभा-जेनेरिक 3d. कदम ‘; ‘ के रूप में प्रदान की सामग्री के संबद्ध बिलअनुपूरक तालिका 1: कस्टम निर्मित उपकरणों-BOM. xlsx। इसके अलावा अनुपूरक तालिका २ ९६ खैर प्लेट _loader- Pinout तारों आरेख.xlsx, जो सिस्टम के विभिन्न घटकों से कनेक्ट केबलिंग कनेक्शन का वर्णन करता है देखें । ‘ Interconnector_circuit_board. डुबकी ‘ एक सर्किट बोर्ड का वर्णन करता है जो केबलों को जोड़ता है ।
यदि डिवाइस को अपनी यात्रा के बीच के चरण के साथ निष्क्रिय कर दिया जाता है, तो चरण बिजली कट जाने के बाद आगे बढ़ जाएगा क्योंकि यह स्प्रिंग-लोडेड है । पावर पुनर्स्थापित किया जाता है, जब प्रतिक्रिया लूप अंतिम ज्ञात निर्धारित स्थिति और वास्तविक स्थिति के बीच एक बड़ा अंतर का पता लगाने जाएगा । इस चरण के लिए अचानक स्थिति यह जब उपकरण निष्क्रिय था में था स्थानांतरित करने के लिए कारण होगा । इस अचानक गति encoders के उत्पादन में त्रुटियों के कारण कर सकते हैं, तो देखभाल के लिए डिवाइस निष्क्रिय करने के लिए लिया जाना चाहिए केवल जब वह अपनी यात्रा के शीर्ष पर अपनी शक्तिहीन आराम की स्थिति में है ।
निर्माण क्लैंप थाली शरीर और सिलिकॉन नीचे एक तरह से एक साथ है कि इष्टतम संबंध की अनुमति देता है लाने के लिए बनाया गया है । इस अंत करने के लिए, वहां तीन पूरक फ़ाइल ‘ प्रेस मरो-जेनेरिक 3d में प्रस्तुत डिजाइन में प्रमुख विशेषताएं हैं । कदम ‘ । सबसे पहले, क्लैंप प्लेट शरीर धारक सिलिकॉन नीचे करने के लिए समानांतर है । यदि यह ठीक से बनाया गया है, यह प्रारंभिक सेटअप के बाद कोई समायोजन की आवश्यकता होगी । दूसरा, दबाना में फोम रबड़ की परत प्लेट के तहत अनुपालन की एक छोटी राशि प्रदान करता है, एक पूरी तरह से कठोर प्रणाली के रूप में सैद्धांतिक रूप से अनंत clamping बल को जब दबाना बंद कर दिया गया था शक्ति को दबाना शूंय से अचानक वृद्धि का अनुभव होगा । crossbar की स्थिति और दबाना के पेंच सेट समायोज्य रहे है ताकि क्लैंप के दोनों पक्षों के बीच की दूरी ठीक-देखते हो सकता है ।
हर प्रयास तनाव लक्षण वर्णन प्रयोगों के दौरान अच्छी तरह से नीचे डॉट के पीछे एक उज्ज्वल, सफेद पृष्ठभूमि प्रदान करने के लिए किया जाना चाहिए । इन छवियों में बेहतर इसके विपरीत, आसान यह ऊंचाई और चौड़ाई को मापने की प्रक्रिया को स्वचालित होगा, जो एक मानव एक बड़े प्रयोग का विश्लेषण ऑपरेटर के लिए थकाऊ हो सकता है । एक अच्छी तरह से एक ९६-अच्छी थाली में एक कुआं के नीचे की उच्च गति वीडियोग्राफी चुनौतियों प्रस्तुत करता है क्योंकि अच्छी तरह से दीवारों को छाया डाली जाती हैं । एक गुंबद प्रकाश या फैलाना अक्षीय प्रकाश है कि छवि अस्पष्ट बिना कैमरे की दृष्टि की रेखा के साथ रोशन कर सकते है का उपयोग छाया या specular प्रतिबिंब है कि एक पारंपरिक प्रकाश स्रोत के साथ पैदा होता है समाप्त । प्रतिभाशाली उपलब्ध प्रकाश स्रोत का इस्तेमाल किया जाना चाहिए क्योंकि उज्ज्वल रोशनी छवियों एक कम जोखिम समय के साथ प्राप्त करने की अनुमति देता है । लघु जोखिम बार गति कलंक को कम । फैलाना अक्षीय प्रकाश में प्रकाश उत्सर्जक डायोड (एल ई डी) उन्नयन उच्च गति वीडियो अधिग्रहण के दौरान कम जोखिम बार की अनुमति देता है. एल ई डी को फैलाना अक्षीय प्रकाश खोलने के द्वारा उंनत किया जा सकता है, शेयर एल ई डी हटाने, बढ़ते 4 उच्च शक्ति वापस फलक एल ई डी धारकों का उपयोग करने के लिए arrays एलईडी, उंहें एक निरंतर मौजूदा बिजली की आपूर्ति के लिए जोड़ने, और फैलाना अक्षीय प्रकाश reकोडांतरण ( तालिका देखें सूची संख्या के लिए सामग्री) । एल ई डी उंनयन के नुकसान यह है कि निष्क्रिय ठंडा एल ई डी पर अधिक से अधिक overheating के जोखिम के कारण कुछ सेकंड के लिए नहीं रखा जा सकता है । इसलिए, पोस्ट-ब्लॉक और कैमरा समायोजन के संरेखण के लिए एक अलग प्रकाश की आवश्यकता है ।
एक झिल्ली पर मुद्रांकित डॉट के फैलाव को मापने के द्वारा झिल्ली तनाव को बढ़ाता के प्रस्तुत विधि अपेक्षाकृत कच्चे तेल है, लेकिन यह एक मजबूत तरीके से कई कुओं के लिए पैमाने पर कर सकते हैं । अच्छी तरह से नीचे तनाव क्षेत्र डिजिटल छवि सहसंबंध का उपयोग अधिक विस्तार में विशेषता हो सकती है । इस तकनीक को अच्छी तरह के आधार पर एक धब्बेदार पैटर्न छिड़काव शामिल है और फिर यह विकृति के दौरान उच्च गति पर इमेजिंग । वाणिज्यिक सॉफ्टवेयर तो धब्बेदार पैटर्न के विकास पर नज़र रखने से छवि में हर बिंदु पर तनाव यों तो इस्तेमाल किया जा सकता है ।
इस प्रोटोकॉल hiPSCNs में एक बहुआयामी, नैदानिक प्रासंगिक, खिंचाव चोट phenotype पैदा करता है । कोशिका मृत्यु, neurite अध कि, और neurite मनके सभी अच्छी तरह से प्रलेखित sequelae है मानव और पशु मॉडल में TBI के15। इस मॉडल में सफलता की कुंजी स्थापित करने और स्वस्थ संस्कृतियों को बनाए रखने है । सामांयतया, एक सेल संस्कृति पारंपरिक कठोर प्लेटों के साथ विकसित प्रोटोकॉल स्केलेबल थाली संस्कृति के लिए एक सार्थक प्रारंभिक बिंदु है । हालांकि, संभावना है कि सवाल में कोशिकाओं सिलिकॉन पर अलग ढंग से प्रतिक्रिया कर सकते है हमेशा विचार किया जाना चाहिए । यह विशेष रूप से hiPSCNs के सच है, जो बहुत संस्कृति की स्थिति के प्रति संवेदनशील हैं । सेल घनत्व और laminin एकाग्रता के अनुकूलन के कुछ उदाहरण प्रतिनिधि परिणाम खंड (चित्रा 3, चित्रा 4) में आपूर्ति कर रहे हैं । प्लाज्मा उपचार के साथ सिलिकॉन के सक्रियकरण महत्वपूर्ण है । सिलिकॉन hydrophobic और प्रतिक्रियात्मक है; अपने प्राकृतिक राज्य में, यह laminin या अंय अणुओं को सेल लगाव को बढ़ावा देने के लिए इस्तेमाल नहीं बांध जाएगा । प्लाज्मा उपचार हाइड्रोफिलिक सतह प्रदान करता है और सक्रिय समूहों को उजागर करता है । ये परिवर्तन आसंजन अणुओं सिलिकॉन से बाइंड और सेल लगाव को बढ़ावा देने के लिए अनुमति देते हैं । यह नोट करने के लिए महत्वपूर्ण है कि प्लाज्मा उपचार प्रभाव एक मिनट के भीतर फैलने जब तक सतह तरल में जलमग्न है, और इतनी प्रक्रियाओं है कि सक्रिय सतह सुखाने शामिल के रूप में जल्दी संभव के रूप में प्रदर्शन किया जाना चाहिए । एक सरल तरीका है अगर प्लाज्मा उपचार के प्रभाव से पहना है की जांच करने के लिए सतह पर पानी की एक छोटी बूंद जगह है । अनुपचारित सिलिकॉन पर, छोटी बूंद को मनका जबकि प्लाज्मा इलाज सिलिकॉन पर होगा, यह बाहर फैल जाएगा । hiPSCNs है कि हम इस्तेमाल के साथ ( सामग्री की तालिकादेखें), निर्माता की सिफारिश की बजाय पूर्व कोटिंग सेल निलंबन के साथ laminin जोड़ने । इस प्रोटोकॉल ने इस approach को सफलतापूर्वक शामिल किया है । जबकि विभाजन, सिद्धांत रूप में, खुले स्रोत सॉफ्टवेयर या सामांय प्रयोजन प्रोग्रामिंग भाषाओं, इन उपकरणों के साथ प्रवीणता के एक उच्च डिग्री के साथ पूरा किया जा सकता है अच्छे परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक है । Neurites अक्सर पृष्ठभूमि संकेत से अंतर करने के लिए मुश्किल है क्योंकि वे इतना पतला कर रहे हैं । इसलिए, हम वाणिज्यिक सॉफ्टवेयर विभाजन और न्यूरॉन्स के ठहराव के लिए समर्पित मॉड्यूल के साथ उच्च सामग्री माइक्रोस्कोपी कंपनियों द्वारा वितरित के उपयोग की सिफारिश, अगर वे उपलब्ध हैं. यहां तक कि वाणिज्यिक सॉफ्टवेयर के साथ, यह विभाजन की छवियों का निर्यात करने के लिए नेत्रहीन सटीकता की पुष्टि बुद्धिमान है ।
पारंपरिक, कठोर प्लेट के साथ काम करने के लिए तुलना में खिंचाव प्लेटों में काम करने के साथ जुड़े कुछ सीमाएं हैं । स्केलेबल प्लेट हवा उद्देश्यों के साथ सामान्य रूप में imaged किया जा सकता है । हालांकि, विसर्जन उद्देश्यों के साथ इमेजिंग बहुत मुश्किल है । लेंस तेल सिलिकॉन नुकसान हो सकता है । इसके अतिरिक्त, उद्देश्य सिलिकॉन झिल्ली पर दबाव डालती है क्योंकि यह ऊपर की ओर घूमती है । यह दबाव झिल्ली को लंबवत विस्थापित कर देता है, जिससे नमूना को ध्यान में लाना कठिन हो जाता है. सिलिकॉन झिल्ली वर्तमान में प्लेटें गढ़े में इस्तेमाल लगभग २५० µm मोटी हैं । यह मोटाई कई उच्च शक्ति, विसर्जन उद्देश्यों की फोकल दूरी से अधिक है । विशेष देखभाल के लिए माइक्रोस्कोपी के लिए आवश्यक संकुचन को प्राप्त करने के लिए clamping से पहले पूरी तरह से फ्लैट झिल्ली बिछाने के लिए लिया जाना चाहिए । फोकस सिस्टम कुछ हद तक समाप्त थाली के संकुचन में विचलन के लिए क्षतिपूर्ति कर सकते हैं । प्रोटोकॉल के भविष्य के संस्करणों पूर्व तनाव झिल्ली हो सकता है पहले यह थाली शीर्ष करने के लिए बंधुआ है सपाटता सुनिश्चित करते हैं । चिपकने वाला मुक्त प्रक्रिया के लिए सिलिकॉन झिल्ली बांड शीर्ष14 के लिए वर्तमान प्रोटोकॉल की एक महत्वपूर्ण ताकत माना जाता है । यह चिपकने वाला से neurotoxicity के जोखिम के रूप में अच्छी तरह से चिपकने वाली परत की गैर-समान मोटाई के कारण संकुचन में किसी भी विचलन से समाप्त होता है ।
मल्टी इलेक्ट्रोड arrays सामांयतः hiPSCNs के साथ प्रयोगों में इस्तेमाल के लिए उनकी परिपक्वता और कार्यक्षमता का आकलन कर रहे हैं । क्योंकि सेल संस्कृति सब्सट्रेट कठोर है दुर्भाग्य से, इन पद्धतियों इस मॉडल के साथ असंगत हैं । यह एक स्केलेबल बहु इलेक्ट्रोड सरणी बनाने के लिए संभव है, हालांकि यह अब तक केवल एक अच्छी तरह से प्रारूप16,17में प्रदर्शन किया गया है । ध्यान दें कि इंडेंटर को इंडेंटर ब्लॉक से व्यक्तिगत रूप से निकाला जा सकता है ताकि कुछ कुओं को इंडेंट न किया जा सके और शम्स के रूप में कार्य कर सकें. इंडेंटेशन निकालने से इंडेंटेशन रोकता है लेकिन यांत्रिक लोडिंग को पूरी तरह से समाप्त नहीं करता है क्योंकि अवस्था के चलते ही कुएं में द्रव का अभी भी inertial गति होता है । यह प्लेटों में कुओं के लिए इन कुओं की तुलना करने लायक है कि कभी भी द्रव गति के किसी रोग के प्रभाव को मापने के लिए मंच गति के अधीन थे । इसके अलावा, ब्लॉक में इंडेंटर्स की सरणी bisymmetric होना चाहिए (सामने से पीठ और पक्ष की ओर सममित) । इस एहतियात यह सुनिश्चित करता है कि थाली इंडेंट के दौरान समान रूप से भरी हुई है, ताकि चरण बग़ल में झुका नहीं और छड़ को उनके बीयरिंगों में बांधने में परेशानी न हो ।
neurotrauma में चिकित्सकीय नवाचार के लिए प्राथमिक चुनौतियों में से एक जटिलता और हालत की विविधता है । आघात केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में हर कोशिका प्रकार के लिए बहु-मोडल तनाव एक साथ लागू होता है । न्यूरॉन्स मज़बूती से मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (hiPSCs) से उत्पन्न किया गया है और अब व्यापक रूप से वाणिज्यिक विक्रेताओं से उपलब्ध हैं. नवाचार जल्दी इस क्षेत्र में आगे बढ़ रहा है, और अंय astrocytes18 और microglia19 के रूप में तंत्रिका कोशिका प्रकार भी hiPSCs से प्राप्त किया जा रहा है । यह जल्द ही सेल को अलग करने के लिए संभव हो सकता है इन विट्रो में आघात करने के लिए इन सेल प्रकार के प्रत्येक के स्वायत्त प्रतिक्रियाओं और फिर सह संस्कृति अलग सेल प्रकार समझने के लिए कि कैसे वे आघात के बाद संवाद. इस तरह, यह अंततः एक मानव प्रणाली में अच्छी तरह से इसे समझने के लिए नीचे से नैदानिक चुनौती बहलाना संभव हो सकता है । यह दृष्टिकोण पारंपरिक मूषक मॉडल पर निर्भर दृष्टिकोण से अलग है और उपंयास अंतर्दृष्टि उत्पंन करने की क्षमता है कि इस आम, विनाशकारी, और असभ्य हालत के लिए पहले चिकित्सा के लिए सीसा ।
The authors have nothing to disclose.
यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (R21NS098129) से अनुदान द्वारा भाग में समर्थित है । हम SueSan चेन, जोनाथन टैन, कोर्टनी Cavanaugh, शि काई एनजी और फेंग युआन बु, जो डिजाइन और एक संरचना के लिए इस पांडुलिपि में वर्णित उच्च गति इमेजिंग प्रयोगों के दौरान इस्तेमाल किया रोशनी का समर्थन करने के लिए बनाया से उत्कृष्ट तकनीकी सहायता स्वीकार करना चाहते है .
.010" Silicone Sheet | Specialty Manufacturing, Inc | #70P001200010 | Polydimethylsiloxane (PDMS) sheet |
Sparkleen | Fisher Scientific | #043204 | |
Nunc 256665 | Fisher Scientific | #12-565-600 | Bottomless 96 Well Plate |
Kim Wipes | ULINE | S-8115 | |
Plasma Cleaner | Harrick Plasma | #PDC-001-HC | |
(3-Aminopropyl) triethoxysilane | Sigma-Aldrich | #440140 | APTES |
Parchment Paper | Reynolds | N/A | |
Dome Light | CCS inc | LFX2-100SW | |
Dome Light Power Supply | CCS inc | PSB-1024VB | |
Axial Diffuse Lighting Unit | Siemens | Nerlite DOAL-75-LED | Diffuse axial light |
High Power LED Array | CREE | XLamp CXA2540 | High Power LED Array |
LED holder | Molex | 1807200001 | LED Holder |
LED power supply | Mean Well | HLG-320H-36B | Constant Current Power Supply |
FastCam Viewer software | Photron | camera softeware | |
Fastcam Mini UX50 | Photron | N/A | High Speed Camera |
Micro-NIKKOR 105mm f/2.8 | Nikon | #1455 | High Speed Camera Lens |
0.1 mg/mL Poly-L-Ornithine | Sigma-Aldrich | #P4597 | |
iCells | Cellular Dynamics International | #NRC-100-010-001 | |
iCell media | Cellular Dynamics International | #NRM-100-121-001 | |
iCell supplement | Cellular Dynamics International | #NRM-100-031-001 | |
Laminin | Sigma-Aldrich | #L2020 | |
Hoechst 33342 | Fisher Scientific | #H3570 | |
Calcein AM | Fisher Scientific | #C3099 | |
voice coil actuator | BEI Kimco | LA43-67-000A | |
optical linear encoder | Renishaw | T1031-30A | |
servo drive | Copley Controls | Xenus XTL | |
Controller | National Instruments | cRIO 9024 Real Time PowerPC Controller | |
cRIO chassis | National Instruments | cRIO 9113 | |
digital input module | National Instruments | NI 9411 | |
data acquistion chassis | National Instruments | NI 9113 | |
LabVIEW | National Instruments | instrument control software | |
hiPSCNs | Cellular Dynamics International |