Summary

Eine In-Vivo -Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke in einem Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls

Published: March 11, 2018
doi:

Summary

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine hoch reproduzierbare Technik für in Vivo Beurteilung der Blut – Hirn-Schranke Störung in Ratte-Modelle des ischämischen Schlaganfalls liefern.

Abstract

Ischämischen Schlaganfall führt zu Vasogenic zerebrales Ödem und anschließende primäre Hirnverletzung, die durch Zerstörung der Blut – Hirn-Schranke (BBB) vermittelt wird. Ratten mit induzierter ischämischen Schlaganfall wurden gegründet und als in Vivo Modellen verwendet, um die Funktionsfähigkeit der BBB zu untersuchen. Photometrische Erkennung von Evans blau (EB) in den Gehirn-Proben mit ischämischen Verletzungen konnte die Forschung und Entwicklung von neuartigen therapeutischen Modalitäten zuverlässig begründet. Diese Methode liefert reproduzierbare Ergebnisse und gilt in jedem Labor ohne spezielle Ausrüstung. Hier präsentieren wir Ihnen eine visualisierte und technische Leitlinie zur Detektion der Extravasation von EB nach Induktion der ischämische Schlaganfall bei Ratten.

Introduction

Vasogenic Hirnödem wegen Störung der Blut – Hirn-Schranke (BBB) bleibt eine wichtige Komplikation des ischämischen Schlaganfalls und eine wichtige Determinante für die Überlebensrate in der Schlaganfall-Patienten1,2. Die Blut – Hirn-Schranke (BBB), die durch Kapillare endothelial Zellen im Gehirn (BCECs) gebildet und besteht aus verschiedenen neurovaskuläre Komponenten (z. B. enge Kreuzungen unter Perizyten, BCECs, Astroglial und neuronalen Zellen3), bietet eine spezialisierte und dynamische Schnittstelle zwischen dem zentralen Nervensystem (ZNS) und peripheren Durchblutung4,5. Beleidigungen wie Ischämie-Reperfusion Verletzungen könnte stören die funktionelle Integrität der BBB und führen nachträgliche Eindringen von zirkulierenden Leukozyten in das Gehirn Parenchym, die letztlich zerebrale Entzündung und primäre Hirnverletzungen auslösen 6 , 7. Tiermodelle für die genaue Erfassung der Dysfunktion des BBB nach Auftreten eines Schlaganfalls erforderlich sind. Solche Modelle sind von großer Bedeutung für die Untersuchung zugrunde liegenden pathophysiologische Mechanismen und Einführung von neuen neuroprotektive Strategien. In-vitro- Kultur-basierte Zellmodelle der BBB hoch entwickelt und verwendet für molekulare Studie der BBB Physiopathologie8,9,10. In Vivo Tiermodellen, die ischämische Schaden der BBB analog zu menschlichen klinischen Bedingungen zu produzieren, sind jedoch auch in dieser Hinsicht sehr lohnenswert. Quantitativen Nachweis der Extravasation von Evans blau (EB) ist eine gut angenommen und empfindliche Technik, die für die Beurteilung der BBB Integrität und Funktion bei neurodegenerativen Erkrankungen, einschließlich der ischämischen Schlaganfall11, verwendet worden ist 12 , 13 , 14. diese Methode ist kostengünstig, machbar, reproduzierbare und völlig zutreffend in einem experimentellen Labor. Ihre Umsetzung erfordert keine vorgerückte Ausrüstung, wie radioaktive Tracer15 oder Magnetresonanz-Bildgebung (MRI)16, die Voraussetzung für andere Methoden sind. In diesem Artikel zeigen wir umfassend grundlegende technische Prozesse der BBB Bewertung mit EB Extravasation in Ratte-Modelle des ischämischen Schlaganfalls.

Protocol

Alle Verfahren wurden nach den Richtlinien der Ardabil University of Medical Sciences Research Council für die Durchführung von Untersuchungen an Tieren durchgeführt (ethische ID-Nummer: IR. ARACEAE. REC.1394.08). In dieser visualisierte Studie verwendeten wir Erwachsene männlichen Sprague-Dawley Ratten (300-350 g) aus Weide Institut (Teheran, Iran) gewonnen. 1. Anästhesie und Flowmetry Induzieren Sie Anästhesie mit 4 % Isofluran und pflegen Sie es mit Isofluran (1-1,5 %) in ei…

Representative Results

Es gab keinen signifikanten Unterschied in EB Ebenen in der rechten Hemisphäre im Vergleich zu der linken Hemisphäre der Schein betrieben Ratten (1,06 ± 0,1 µg/g und 1,1 ± 0,09 µg/g, beziehungsweise). Siehe Figuren 2A-2 b, Induktion von transienten Ischämie (90 min Ischämie / Reperfusion 24 h) verursacht einen signifikanten Unterschied in EB Ebenen (10,41 ± 0,84 µg/g, p < 0,001) in der linken Hemisphäre von ischämischen Ratten, im Vergleich zu den jew…

Discussion

So weit, verschiedene Methoden wie Autoradiographie und Erkennung der radioaktiven Tracern24,25, Immunfluoreszenz-Mikroskopie26,27und EB Extravasation Technik20, 23 wurden verwendet, um die Blut – Hirn-Schranke Schaden zu bewerten. EB-Farbstoff kann sich stark an der Serum-Albumin gebunden und dient als Tracer für vaskuläre Leckagen Erkennung u…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Die Autoren sind dankbar für den Vizekanzler für Forschung der Ardabil Universität der medizinischen Wissenschaften (Ardabil, Iran) für die finanzielle Unterstützung (No zu gewähren: 9607).

Materials

Isoflurane Piramal AWN 34041100 20 – 25 °C
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) Molekula 31216368 4 years
Sprague–Dawley rats  Pasture Institute (Tehran, Iran) 300-350g
Evans Blue  Sigma-Aldrich  314-13-6
Trichloroacetic acid  Sigma-Aldrich  76-03-9 2 years
Bupivacaine HCl (0.5%) Delpharm Tours below  25 °C
Bupernorphine Exir (Iran)
Sodium Carbonate Sigma-Aldrich  497-19-8
Sodium chloride  Sigma-Aldrich  7647-14-5
Di- Sodium hydrogen phosphate EMD Millipore  231-448-7
Potassium chloride Sigma-Aldrich   7447-40-7
Ethanol  Sigma-Aldrich  64-17-5
silicone(Xantopren) Heraeus EN ISO 4823
Activator universal plus Heraeus 66037445
Micro-Dissecting forceps Stoelting 52100-41
Spring Scisors Stoelting 52130-00
Operating  Scissors Roboz 52140-70
Brain matrix  Stoelting 51390
Anesthesia Machine for Small Animals |  Kent Scientific SS-01
Power Lab system AD Instruments ML880
Laser Doppler flowmeter AD Instruments ML191
Heating feed back system Harvard Appratus 72-7560
Vascular micro clamp FineScience Tools 18055-03
Silk 5-0 suture thread Ethicon 682G
Ethilon 4-0 suture thread  Ethicon EH6740G

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Panahpour, H., Farhoudi, M., Omidi, Y., Mahmoudi, J. An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke. J. Vis. Exp. (133), e57156, doi:10.3791/57156 (2018).

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