This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.
Drosophila kullanarak Çiftleşme deneyleri cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Deneyler genellikle deneme bireyler arasında ayrım basit, kolay ve ucuz yöntemler gerektirir. Bunun için standart bir yöntem, her sinek kırpma CO 2 anestezi ve ardından etiketleyerek veya kanat. Bununla birlikte, bu invaziv ve davranışını etkilemek için gösterilmiştir. Diğer teknikler sinekleri tanımlamak için renklenme kullandık. Bu makalede, gıda boyası kullanarak, onları ayrı ayrı deneylerde içinde tespit edilmesini sağlar etiketleme Drosophila için basit ve non-invaziv bir yöntem sunar. Bu yöntem, iki erkek bir kadın çiftleşmek için rekabet çalışmalarda kullanılmaktadır. Boyama hızlı ve kolay tanımlanmasını sağladı. Test edilen üç tür arasında renk mukavemetinde bir fark ise, oldu. Veri boya gösteren sunulmuştur Drosophila Melano CO 2 den çiftleşme davranışı üzerinde bir alt etkiye sahiptirgaster. CO2 anestezi etkisi D ile, Drosophila türleri bağlıdır gösterilmiştir pseudoobscura ve D subobscura, D. ise hiçbir etkisi gösteren melanogaster erkek çiftleşme başarısını düşürmüştü. sunulan boya yöntemi deney tasarımları geniş bir aralığına uygulanabilirdir.
Son birkaç yıldır orada evrim 1,2 tarihinde nasıl cinsel seçimi ve rekabet erkekler arasındaki etkisi ilgi artmaktadır. Çiftleşme davranışı üzerinde deneyler geliştirilmesi ve cinsel seçimi 3,4 teorileri test önemli bir rol oynamıştır. Cinsi Drosophila özellikle, araştırma kullanarak türlerde, cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Ancak, yaygın olarak kullanılan teknikler standart çiftleşme deneyler 5,6 sonuçlarını yapay önyargı olup olmadığını araştırmak önemlidir.
Anestezi genellikle deneylerde 7 kullanım ve tanımlanması için kullanılır. Örneğin, sinekler genellikle çiftleşme öncesi toplanır, ya da (CO 2) anestezik karbondioksit kullanarak genotipleri veya deneysel tedaviler halinde sıralanır. Çoğunlukla, ayırt edilmesi gereken deneylerde, fl anastetize yaygın bir uygulamadırler ve kanat off klip parçası, her birey ya da tedavi grubunu 5,8 tanımlamak için. Ancak, CO 2 tedavi davranışını nasıl etkilediğini anlamak için, hayati önem taşımaktadır. CO 2 anestezi etkisi Drosophila melanogaster incelenmiştir edildiği 2 çiftleşmek için uzun anlamlı aldı ve genel olmayan anestezi erkek veya erkeklerden daha düşük çiftleşme başarı vardı, soğuk 5 maruz kullanılarak anestezi CO maruz erkek çocukların. Bu etki gözlenmiştir uygun anestezi deney gününde uygulanır ve zaman sinekler kurtarmak için bir gün verildiğinde. Ancak, bu çalışma bir tek erkek, her kadın 5 sunuldu yalnızca inceleyen çalışmalarda sınırlı kalmıştır. Bir kadın yüzünden anestezi erkek uygunluk daha ince kayıpların tespitine olanak olabilecek erkekler arasındaki rekabeti sağlayan, birden fazla erkek 9,10 karşılaşmaya için daha gerçekçi bir senaryo. CO 2 anestezi kullanımı da olacak ettitr yetişkin D. doğurganlığını ve uzun ömürlü azaltmak bulundu Onlar eclosion kısa bir süre sonra maruz kaldığında bakire toplama 11 uçar zaman yaygın olarak, melanogasterin.
2 anestezi CO bir alternatif onları boya 4,6,10,12,13 ile renkli gıda beslenerek sinekler işaretlemek için. Bu boya renkli sinekler renksiz sinekler, ya da farklı bir renk ile etiketlenmiş sinekler ayırt edilmesi için izin, sineğin bağırsak girer ve karın içinden görünür. Boyalı ek maya hamur 6 üzerinden, ya da yeni bir boyalı gıda alt tabakaya 13 maruziyeti üzerinden, gıda 12 doğrudan eklenen: Yöntem nasıl bu uygulanabilir farklıdır. Bu işaretleme teknikleri çiftleşme performansı 4,6 üzerinde hiçbir etkisi göstermeye görünür. Ancak, kağıt doğrudan yetişkin D aynı gıda boyası etkilerini inceleyen melanogaster ömrü 14 güçlü azalma bulundu. Önceki çalışmalar da alm odaklanmıştırost tamamen D. üzerinde melanogaster, hem CO 2 anestezi 5,11 ve gıda boyası 14 yöntemleri etkileri ile ilgili. Şu anda, CO 2 anestezi veya bağırsak boyama kullanımı diğer Drosophila çiftleşme davranışı nasıl etkilediğini çok az bilgi vardır.
Aşağıdaki inceleme, Drosophila üç türün (D. melanogaster, D. pseudoobscura ve D subobscura) çiftleşme davranışı üzerinde CO2 anestezi etkisi değerlendirilmektedir. CO 2 sinekler toplama etkisi tek ve iki erkek çiftleşme denemeleri hem de incelenmiştir. CO2 etkisi de D. değişir bulunmuştur melanogaster 5 ve CO 2 maruz kalma ve çiftleşme arasındaki çok farklı gecikme süreleri test edildi. Anestezi ve kanat kırpma yöntemi işaretleme alternatif: sinekler leke gıda boyaların kullanımı da değerlendirilir.
Bu veriler, CO2 anestezi etkisinin az etkisini gösteren iki ya da üç türe, türler arasında tutarlı olduğunu göstermektedir. Bizim sonuçlar gıda boyası ile etiketleme 2 anestezi D için CO daha erkek çiftleşme başarısı daha düşük etkiye sahip önermek melanogaster. Bu deneyler, gıda boyaları, kolayca ve ucuz bir şekilde birden çok erkek içeren birleşme deneyleri için etiket sinekleri için kullanılabileceğini göstermektedir.
Üç modeli Drosophila türlerinin yalnızca D., incelenen melanogaster, rekabetçi bir durumda birleşme performansına CO2 anestezi etkisi göstermiştir. Bunun aksine, türlerin yok D için önceki sonuçlara aksine birleşme gecikme bakımından tek birleşme deneylerinde gaz toplama bir etki gösterdi melanogaster 5. rekabetin etkisi bu nedenle sadece saptanabilir CO 2 anestezi daha ince spor etkileri, vurgulama olabilirdurumlar altında erkek-erkek rekabet olduğu yerde. Erken toplama ve bir gün Pozlama deneme öncesinde D. erkeklerin yeteneği üzerinde olumsuz bir etkisi var Bir çiftleşme kazanmak için melanogasterin. İki gün önce deneme maruz kalma, ancak herhangi bir etkisi görülmemiştir. D. Hem pseudoobscura ve D subobscura çalışmaların hiçbirinde gazına maruz herhangi bir etki göstermemiştir. Bir açıklama olduğunu D. erkek bakire olmasını sağlamak için diğer türlere göre daha – (6 saat eski 0) daha önce hayatında toplanan gerekir, çünkü melanogaster CO 2 erken maruz savunmasız oldu. Dolayısıyla erkek D. sineğin manikür hala sertleşmesine kendi manikür için uzun oldu, diğer türlere oranla, sertleşme gibi bu çağın melanogaster daha duyarlı olabilir. Genel olarak, bu CO 2 anestezi etkileri belirli türleri ve uygun hedef türlerin etkisini test etmelidir araştırmacılar olduğu fikrini desteklemektedir. Currently CO2 anestezinin etkisi üzerinde çalışma çoğunluğu diğer ilgili türlerin uygulamak için uygun olmayabilir, bu nedenle Drosophila melanogaster 5,11,22 ile yapılmıştır edilmiştir.
sinekler ayırt etmek için sunulan alternatif non-invaziv bir yöntem gıda boyası olduğunu. Sonuçlar Bu tedavi tüm türler incelendiğinde genelinde hiçbir etkisi yoktu öneririz. Kullanımı bireyler arasında ayrım yapmak için, ucuz ve kolay bir şekilde görünür bir marker sağlaması başarılı oldu Bununla birlikte, bu boya D. ayırt kolay olduğu unutulmamalıdır pseudoobscura ve D D. daha subobscura melanogaster. Önceki yazarlar 4,6 (yeşil ve mavi kırmızı) birkaç renk kullandık. Biz, D. bütün türlerde ayırt etmek kolay, özellikle olmaya mavi boyama bulundu pseudoobscura ve D subobscura. Potansiyel birçok bireysel işaretlenmiş Flie ile daha karmaşık deneyler sağlayacak birkaç renk kullanmas. Bazı gıda boyaları tüketildiği zaman muhtemelen sindirilmiş olan, sinekler renk başarısız Ancak, farklı boyaların ön testler, esastır. Diğer boyalar) toksik etkilere sahip ve sineklerin yaşam azaltmak ve 14 kaçınılmalıdır olabilir. Daha pahalı boyalar kullanılarak alternatif gıda boyası yöntemleri de D. bağırsak bütünlüğünü incelenmesi için kullanılmıştır 23 melanogaster. Bunlar bir alternatif sağlayabilir, her ne kadar daha pahalı, boyama yöntemi 23.
sinekler koleksiyonundan boyalı gıda saklanabilir gibi boya yöntemi CO 2 kanat kırpma gibi hızlı. Gıda alımı, (~ 3 saat), hızlı, yani diğer çalışmalar 6 da kullanılan renkli gıda depolama O / N da sinekler işaretlemek için yeterli olacaktır. (- 12 gün 10) 24 işaretleme kanat (daimi) kırpma veya floresan tozu ile karşılaştırıldığında – (5 saat ~ 4) Bununla beraber, boyama süresi oldukça kısadır. Drosophila türlerinin olarakgörünümü değişir, farklı boyalar daha az ya da farklı türler için geçerli olacaktır, ve bazı suşlar olarak (örneğin, knock-out mutantlar) diyet değişikliklerine savunmasız olabilir, boyanın herhangi bir şekilde kullanılması etkinliğinin bir ön test, özellikle uzun eğer gerektirir boyalara süreli maruz kalma 14 toksik olabilir. Kalaw ve diğ., 14 çalışmasının tersine olarak, D, renkli gıdalar birden fazla gün depolandıktan sonra belirgin bir ölüm oranı olduğunu bulmuştur melanogaster (3 gün), D. pseudoobscura (5 gün) veya D subobscura (7 gün), muhtemelen boyada farkı için kullanılır.
boya tekniği başarılı kullanımı için kritik adım seçilen boya türleri ve gerilme kullanılan iyi çalıştığını doğrulayarak, adım 1.5 olduğunu. Alternatif bir teknik alan deneyleri 24 kullanımdan önce sinek dışında renkli toz uygulanmasını kapsar. Bu yöntem alan nedeniyle t bireyleri izlemek için kullanılır olmuşturo işaretleme süresi ve işaretleme kitle kolaylığı 24 uçar. Biz açıkça çiftleşme çalışmalarda bu yöntemi test olmasına rağmen, bu toz, özellikle Drosophila 25, 26, çiftleşme önemli duyulara sahip olabilir, herhangi etkilerini incelemek için önemli olacaktır. Türler ise, bağırsak boyama mümkün olmadığı durumlarda, Bu yöntemler, uygun olabilir.
Sonuç olarak test edilen üç türün (D. pseudoobscura ve D. subobscura) iki CO 2 anestezi veya erkeklerin çiftleşme yeteneği gıda boyası ya bulunamadı etkisi olduğunu öğrendim. D. için tespit edildi CO 2 anestezi olumsuz bir etkisi melanogaster, ancak gıda boyası, bu türün başarılı çiftleşme etkilemedi. Genel olarak, boya yöntemi eşdeğer veya CO 2 anestezi gerektiren yöntemlere göre daha iyi olduğunu tek tek Drosophila belirlenmesi için basit ve ucuz bir non-invaziv bir yöntem sağlar. Obüyük olasılıkla bu yöntem türlerinin aralığında çalışacak olan.
The authors have nothing to disclose.
Biz çiftleşme denemeleri ile yardım için Alex Hitchen ve Meg Booth teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma TP H015604 / 1 / Merkezi tarafından hibe KD tarafından desteklenmiştir.
Plastic tubing | Fisher Scientific | TWT-200-061G | Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip. |
Fine mesh | Any haberdashery | – | Fine curtain mesh is suitable |
1ml pipette tips | VWR | 83007-376 | Various brands of pipette tips would be suitable |
Plastic Vials | Sarstedt | 58.49 | Larger vials or bottles could also be used. |
Cotton Balls | Lewis Medical Solutions | 28170 | The size of cotton will vary depending on the size of vials used |
Blue Food colouring | Thesugarcraftcompany | – | Other dye colours and brands can have variable results. |
CO2 Tank | BOC | BOC 40VK | |
Sharpie Markers | Steadtler | Lumocolor 313 S | Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness |
Stopwatch | Salter | SL3920 | Any stopwatch with a good digital display would be fine |