Complexes métalliques anticancéreux: Synthèse et évaluation de la cytotoxicité par le dosage au MTT

La chimiothérapie est encore l'un des principaux cours de traitements utilisés dans la clinique pour diverses maladies cancéreuses, et donc grande quantité de recherche est menée dans le monde entier dans le but de développer de nouvelles et améliorées des médicaments anticancéreux. Ces études commencent surtout au niveau chimique, la conception et la préparation de composés, suivie par l'évaluation biologique des propriétés cytotoxiques in vitro. La viabilité cellulaire peut être évaluée par des dosages différents qui fournissent des informations sur l'activité cellulaire ^2.1.

Le cisplatine est un exemple d'un complexe de platine qui est largement utilisé comme un médicament chimiothérapeutique, qui est considéré comme un traitement efficace surtout pour les cancers testiculaires et ovariennes ^4.3. Toutefois, son domaine d'activité étroit et des effets secondaires graves déclenchent des études d'autres complexes de métaux de transition puissant ^5-8. Entre autres, le titane (IV) et de vanadium (V) complexes ont montré des résultats prometteurs de haute activité et de réduire^9-16 toxicité. Ti (IV) complexes ont été les premiers à entrer en essais cliniques après le cisplatine en raison de ces propriétés, mais ils ont échoué les essais en raison de difficultés de formulation et de l'instabilité à l'hydrolyse. Il existe donc un besoin de développer des dérivés de courant améliorées de ces complexes métalliques qui peuvent combiner une forte activité anti-cancéreuse de la résistance à l'eau ^15,17-21.

Un défi dans la préparation de Ti (IV) et V (V) se réfère à des complexes de l'instabilité hydrolytique des réactifs précurseurs et, par conséquent, une atmosphère inerte doit être maintenue. La préparation de Ti (IV) et V (V) est effectuée dans des composés N ₂ ou Ar conditions dans une boîte à gants ou en utilisant des techniques de ligne de Schlenk.

Une méthode courante pour l'évaluation de l'activité anti-cancer est basée sur le MTT (3 – (4,5-dimethylthiazolyl) de bromure -2,5-diphényltétrazolium) dosage. Ce test est un test de viabilité colorimétrique qui a été présenté en 1983 par Mosmann^22. Il est très bien étudié et caractérisé, et il est considéré comme très efficace pour évaluer l'efficacité de nouveaux composés cytotoxiques en raison de sa précision, de rapidité, et sa capacité à être appliqué sur la variété de lignées cellulaires. Ce test de viabilité est basé sur le changement de couleur de la molécule de MTT quand il est exposé à des cellules viables. La mesure de l'absorbance, qui est proportionnelle au nombre de cellules viables, et la comparaison à des témoins non traités, l'évaluation de la capacité d'inhibition de croissance des cellules du composé testé permet.

Le test colorimétrique MTT est conduite dans un format de plaque à 96 puits ^23. Les cellules peuvent nécessiter une pré-incubation dans les puits avant l'ajout du médicament testé. Les temps de pré-incubation peut varier de 0 à 24 heures en fonction des propriétés de la ligne de cellule. Les cellules sont généralement exposés à la drogue pour 24-96 heures en fonction de l'activité du médicament. Solution de MTT est ensuite ajouté à des cellules traitées, où le hurlentow MTT est réduit en formazan pourpre par une variété d'enzymes mitochondriales et cytosoliques qui sont opérationnels dans les cellules viables (figure 1) ^24. La molécule MTT n'est pas réduite par les cellules mortes ou des cellules rouges du sang (cellules métaboliquement inactives), des cellules de rate (cellules au repos) et la concanavaline A lymphocytes stimulés par les cellules activées ^(22). Après 3-4 heures d'incubation avec les MTT Les précipités formazan. La formation de formazan commence après 0,5 h d'incubation, mais pour des résultats optimaux, il est préférable d'exposer les cellules à du MTT pendant au moins 3 heures ^22. Par conséquent, le milieu de culture est éliminé et le formazan est solubilisé dans un solvant organique, de préférence l'isopropanol ^25, bien que le DMSO peut également être utilisé ^26. L'élimination du milieu est crucial pour l'obtention de résultats précis puisque le rouge de phénol, qui est largement commun dans le milieu de croissance, et en précipitant les protéines peuvent interférer avec la mesure de l'absorbance ^25. Lorsque la formazan solution homogène atteint, l'absorbance de la solution est mesurée en utilisant un spectrophotomètre lecteur de microplaques. L'absorbance à 550 nm est directement proportionnelle au nombre de cellules dans la gamme de 200-50,000 cellules par puits, et donc de très petites quantités de cellules peut être détectée ^22. L'absorbance indique la quantité de cellules viables qui reste après le traitement avec le médicament, et est comparée à l'absorbance des cellules témoins qui n'ont pas été exposés au médicament. L'analyse des résultats par un logiciel approprié fournit la (concentration d'inhibition; 50%) IC ₅₀ valeurs et leurs erreurs statistiques basées sur plusieurs répétitions de la mesure.

Le test MTT est largement commun dans des études de cytotoxicité pour le criblage de nouveaux composés anti-cancéreux, en raison de sa précision et sa relative simplicité. Cependant, lors de l'utilisation du test MTT, qui est dépend de la réaction enzymatique, on doit considérer que les différents inhibiteurs d'enzymes peuvent affecter la réduction du MTT und conduire à des résultats erronés ^27. En outre, le test MTT ne fournit pas d'informations sur le mécanisme moléculaire de l'activité cytotoxique du médicament ^2.