抗癌金属配合物的合成与细胞毒性评价MTT法

化疗仍然是在临床上用于各种癌症疾病的治疗采用的主要课程之一，并由此研究大量的，目的是开发新的和改进的抗癌药物世界范围内进行。这样的研究大多开始在化学级，与化合物的设计和制备，接着在体外的细胞毒性生物学评价。细胞活力可以通过各种检测，提供对细胞活性^1-2的信息进行评估。

顺铂是铂络合物被广泛用作化学治疗药物，它被认为是一种有效的治疗主要针对睾丸癌和卵巢癌^3-4的例子。然而，其狭窄的活动范围和严重的副作用引发的其他烈性过渡金属配合物^5-8的研究。其中，钛（IV）和钒（V）配合物表现出较高的活性的有希望的结果，并减少毒性^9-16。钛（Ⅳ）络合物是第一顺铂后，由于这些特性，进入临床试验，但是，他们并没有审判，由于配方的困难和水解稳定性。因此，有电流需要开发对这些金属配合物可结合高抗癌活性与耐水性^15,17-21改进的衍生物。

中的Ti（IV）和V的制备方法的一个挑战（V）配合物是指将前体试剂的水解不稳定性，因此，在惰性气氛应保持。钛（Ⅳ）和V（Ⅴ）化合物的制备方法为N ₂或Ar条件下，在手套箱中，或使用的Schlenk线技术下进行。

用于抗癌活性的评价的一个常见方法是基于MTT（3 – （4,5 – dimethylthiazolyl）-2,5 – 二苯基溴化）测定。此法是由Mosmann的提出在1983年比色可行性分析^22。它是非常充分的研究和表征，并评估新细胞毒性化合物的效力时，由于其精确度，快速性，及对多种细胞系被应用能力它被认为是高效的。此活力测定是基于当它暴露于活细胞的MTT分子的颜色变化。的吸光度，这是成正比的存活细胞的数量，并且相比于未处理的对照的测定中，使所测试的化合物的细胞生长抑制的能力的评估。

的MTT比色分析法在96孔板形式²³进行。该细胞可能需要预培养在添加了测试药物的前孔中。在预温育时间可以从0-24小时，根据细胞系的属性而变化。细胞通常暴露于药物为24-96小时，这取决于药物的活性。 MTT溶液然后被加入到经处理的细胞，其中所述叫喊超重MTT是由多种线粒体和细胞质酶，操作中存活的细胞（ 图^1）24减少到紫色的甲（formazan）。将MTT分子不是由死细胞或红细胞（代谢不活跃的细胞），脾细胞（静息细胞）和伴刀豆球蛋白A刺激淋巴细胞（活化细胞^）22减小。经过3-4小时培养用MTT甲臜沉淀。甲臜形成0.5小时培养后开始，但为获得最佳结果，最好是将细胞暴露于MTT至少3小时^22。因此，在生长介质中被删除，甲溶解在有机溶剂中，优选异丙醇^25，虽然DMSO也可以使用^26。消除了介质是因为酚红，这是广泛通用于生长培养基中获得准确的结果，并且沉淀的蛋白质可与吸光度测定²⁵干涉的关键。当经残溶液达到均匀，该溶液的吸光度用酶标仪分光光度计测定。在550nm处的吸光度是成正比的细胞以每孔细胞200-50,000的范围内的数目，并且因此可以检测到非常少量的细胞^22。的吸光度表示存活细胞是保持与药物治疗后的金额，并进行比较了未暴露于药物的对照细胞的吸光度。通过适当的软件分析的结果提供了IC ₅₀值（抑制浓度50％）的值及其统计误差的基础上，测定重复几次。

MTT分析是广泛通用的细胞毒性研究中用于筛选新的抗癌化合物，由于它的精度和相对简单。然而，使用MTT测定法，它依赖于酶促反应时，必须考虑各种酶抑制剂可以影响一个MTT的还原ð导致错误的结果^27。此外，本MTT实验不提供对药物²的细胞毒性活性的分子机理的任何信息。