Visualisatie van bacteriële toxine geïnduceerde responsen met Live Cell Fluorescentie Microscopie

Bacteriële toxinen binden aan cholesterol in membranen, vorming van poriën waarmee lekkage van cellulaire inhoud en instroom van materialen uit de externe omgeving. De cel kan herstellen van deze belediging, actief membraan herstelprocessen heeft, of anders sterven, afhankelijk van de hoeveelheid toxine blootstelling en celtype ^1. Bovendien induceren deze toxinen sterke ontstekingsreacties in geïnfecteerde gastheren door activering van immuuncellen, zoals macrofagen, die een array van pro-inflammatoire cytokines ² produceren. Veel Grampositieve bacteriën produceren toxinen die cholesterol binding is aangetoond dat hun virulentie dragen door grotendeels ongekarakteriseerde mechanismen.

Morfologische veranderingen in het plasmamembraan van cellen blootgesteld aan deze toxinen zijn onder opslag in cholesterol verrijkte oppervlaksuitsteeksels, die worden uitgescheiden in de extracellulaire ruimte, wat suggereert een intrinsieke cellulaire verdedigingmechanisme ^3,4. Dit proces treedt op in alle cellen in afwezigheid van metabolische activiteit en kan worden gevisualiseerd met EM na chemische fixatie ^4. In immune cellen zoals macrofagen die ontsteking bemiddelen als reactie op toxine blootstelling worden geïnduceerd membraanblaasjes voorgesteld cytokines van de IL-1 familie bevatten en kunnen verantwoordelijk zijn voor zowel vergieten toxine en verspreiding van deze pro-inflammatoire cytokines ^5,6,7. Een koppeling tussen IL-1β afgifte en een specifiek type van celdood, is genoemd pyroptosis voorgesteld, aangezien beide caspase-1 afhankelijke processen ^8. Te sorteren op de complexiteit van deze macrofagen reactie, die toxine binden, vergieten van membraan blaasjes, cytokine-afgifte, en mogelijk celdood omvat, hebben we etikettering technieken en fluorescentie microscopie methoden die het mogelijk maken voor real-time visualisatie van toxine-cel interacties, met inbegrip van metingen van disfunctie en dood (figuur 1). Gebruikenvan live cell imaging is nodig als gevolg van beperkingen in de andere technieken. Biochemische benaderingen niet kan oplossen die optreden bij de individuele cellen, terwijl flowcytometrie niet bieden een hoge resolutie, real-time visualisatie van de individuele cellen. De hier beschreven methoden kunnen worden toegepast op kinetische analyse van geïnduceerd door andere stimuli ingewikkelde fenotypische veranderingen in cellen.