הבחנת תפקידים פונקציונליים של ביטוי גנים מתאים חיסוניים וללא חיסון בקוליטיס המאוס על ידי השתלת מח עצם

כדי להבין את תפקידו של גן בהתפתחות הדלקת במעי גס, השווה את התגובות של עכברי סוג פראי ועכברי נוקאאוט החסרים הגנטית של ריבית לקוליטיס. אם הגנים של האינטרס מתבטא בשני תאי מח עצם ותאי שמקורם נובעים מח עצם שאינם של המארח, עם זאת, ניתן להבחין את התפקיד של גן של עניין בתאי מח עצם ומקורם במח עצם שאינו תאים שהופקו על ידי טכניקת השתלת מח עצם. כדי לשנות את הגנוטיפ מח העצם נגזר תאים של עכברים, מח העצם המקורי של עכברי נמען נהרסו על ידי הקרנה ולאחר מכן הוחלף על ידי מח עצם מתורם החדש של גנוטיפ השונה. כאשר מח עצם פראי מסוג עכברי תורם הושתל בעכברי נוקאאוט, אנו יכולים לייצר עכברי נוקאאוט עם ביטוי גנים פראי מסוג תאים שמקורם במח עצם. לחלופין, כאשר מח עצם מתורם עכברי נוקאאוט הושתל בעכברי נמען סוג פראי, עכברי סוג פראי ללא גנים של האינטרס להביעממח עצם תאים שמקורם יוצרו. עם זאת, השתלת מח עצם לא יכולה להיות 100%. לכן, אנו מנוצלים מקבץ של בידול מולקולות (CD) (CD45.1 וCD45.2) כסמנים של תאי תורם ומקבל כדי לעקוב אחר שיעור תאי מח עצם מתורם נגזרים בעכברי נמען והצלחה של השתלת מח עצם. עכברי סוג פראי עם CD45.1 עכברי גנוטיפ ונוקאאוט עם גנוטיפ CD45.2 היו בשימוש. לאחר ההקרנה של עכברי נמען, את תאי מח העצם של תורם גנוטיפים שונים שהחדירו לתוך עכברי הנמען. כאשר מח העצם החדש מחדש להשתלט על חסינותה, העכברים היו לערער על ידי סוכן כימי (נתרן גופרתי dextran, DSS 5%) כדי לגרום לדלקת מעי גס. הנה גם אנחנו הראינו את השיטה כדי לגרום לדלקת המעי גס בעכברים ולהעריך את תפקידו של הגן של עניין הביע מתאי שמקורם של מח עצם. אם הגנים של האינטרס מהתאים שמקורם העצם ממלא תפקיד חשוב בהתפתחות המחלה (כגון coliTIS), הפנוטיפ של עכברי נמען עם השתלת מח עצם ניתן לשנות באופן משמעותי. בתום ניסויי קוליטיס, מח העצם נגזר תאי דם ובמח עצם תויגו עם נוגדנים נגד CD45.1 וCD45.2 והיחס הכמותי שלהם לקיום יכול לשמש כדי להעריך את ההצלחה של השתלת מח עצם על ידי cytometry זרימה. השתלת מח עצם מוצלחת צריכה להראות רוב מכריע של גנוטיפ תורם (בטווח של מולקולת סמן תקליטור) על הגנוטיפ נמען הוא במח העצם והדם של עכברי נמען.