Summary

Tüm montaj Embriyonik Sinir Sistemi Görselleştirme Drosophila Embriyolar

Published: December 11, 2010
doi:

Summary

Biz sahnelenen hazırlamak için prosedürü tarif<em> Drosophila</em> Embriyogenez sırasında embriyonik sinir sisteminin görünüm için embriyoların.

Abstract

Drosophila embriyo sinirsel gelişimi hücresel ve moleküler temelini araştırmak için çekici bir model sistem. Burada nöronal proteinler antikor kullanarak Drosophila Embriyonik sinir sisteminden görünüm için prosedürü açıklar. Tüm embriyonik periferik sinir ve merkezi sinir sistemi, tek tek hücrelerin (; Bodmer ve ark, 1987; Dambly-Chaudiere ve ark, 1986 Bodmer ve ark, 1989) bu yana, bu sistemleri herhangi bir sapmaları farklı nöronal proteinlere karşı antikorlar kullanarak kolayca tanımlanabilir. Gelişmekte olan embriyolar, embriyoların uygun görünüm için gelişim evreleri olduğundan emin olmak için belirli zamanlarda toplanır. Toplandıktan sonra, embriyonun dış katmanları, koryon zarı ve embriyo çevreleyen vitellin zarf, fiksasyon önce kaldırılır. Embriyolar sonra nöronal antikorlar ile inkübe edildi ve floresan etiketli sekonder antikorlar kullanılarak görüntülendi. Aşamada Embriyolar 12-17 Embriyonik sinir sistemine erişmek için görüntülendi. Evre 12 CNS germ bant kısaltılması başlar ve 15 sahne komissür kesin bir model elde edilmiştir. Evre 17 ile MSS sözleşmeleri ve PNS tamamen geliştirilmiştir (Campos-Ortega ve ark, 1985). Böylece PNS ve MSS desen değişiklikleri kolayca bu gelişim evrelerinde görülebilir.

Protocol

1. Reaktiflerin hazırlanması 100 mM Borular, 2mm EGTA ve 1 mM MgSO 4 PEMFA Tampon kullanarak hazırlayın. Tamponun pH 7.0 'ye ayarlayın. PEMFA tampon filtresi sterilize ve 4 ° C'de saklanan 1 ml ekleyerek PBT hazırlayın Triton X-100 100ml 1x PBS (fosfat tamponlu tuz) (pH 7.0). 4 ° C saklayınız 1x PBS (pH 7.0)% 0.01 NaAcide ile% 5 BSA (sığır serum albumin) hazırlayın. Salin solüsyonu% 0.7 NaCl ve% 0.03 deiyonize su Triton X-100 kullanarak h…

Discussion

Drosophila embriyo nöronal gelişim sırasında hücresel ve moleküler değişiklikler araştırmak için güçlü bir sistem. Bu protokolde immünohistokimya için bütün montaj embriyoların nasıl hazırlanacağını göstermiştir. Biz bu protokolü Carroll ve Scott, 1985 yılında açıklanan protokol adapte var. Bu protokol aynı zamanda diğer nöronal antikor testi için adapte olabilir, ancak antikorlar optimizasyonu yapılmalıdır. Ayrıca, embriyonik PNS ve merkezi sinir sistemi gelişim kusurlar…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

SG, Buffalo New York Devlet Üniversitesi ve John R. Oishei Vakfı fonları tarafından desteklenmektedir.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
37% formaldehyde   Fisher BP531-25  
CSP   Developmental Studies Hybridoma Bank    
HRP-FITC   Jackson ImmunoResearch Laboratories 323-095-021  
Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG   Invitrogen A-11004  
Vectashield Mounting Medium   Vector Laboratories, Inc. H-1000  

Referências

  1. Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
  2. Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
  3. Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
  4. Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
  5. Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biologia do Desenvolvimento. 113, 288-294 (1986).

Play Video

Citar este artigo
Kaczynski, T. J., Gunawardena, S. Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos. J. Vis. Exp. (46), e2150, doi:10.3791/2150 (2010).

View Video