전체 마운트의 배아 신경 계통의 시각화 Drosophila 태아
Summary
우리는 개최 준비하는 절차를 설명<em> Drosophila</em> embryogenesis 동안 배아 신경 시스템의 시각화를위한 배아.
Abstract
Drosophila의 배아가의 연결을 발전의 세포 및 분자 기초를 조사하는 매력적인 모델 시스템입니다. 여기의 연결을 단백질에 항체를 사용하여 Drosophila 배아 신경 시스템의 시각화를위한 절차를 설명합니다. 전체 배아 주변 신경 및 중추 신경 시스템이 잘 개별 세포 수준 (..; Bodmer 외, 1987;. Dambly – 쇼디에르 외, 1986 Bodmer 외, 1989)에서 특징 때문에, 이러한 시스템에 어떤 aberrations 수 쉽게 다른 단백질의 연결을하기 위해 항체를 사용하여 식별됩니다. 개발 배아는 배아는 시각화에 대한 적절한 발달 단계에 있는지 확인하기 위해 특정 시간에 수집하고 있습니다. 수집 후, 배 (胚)의 바깥쪽 레이어, chorion 막과 배아를 둘러싼 vitelline 봉투가 고정되기 전에 제거됩니다. 배아는 다음의 연결 항체와 incubated하고 찬란 레이블 차 항체를 사용하여 시각입니다. 단계에서 배아가 12-17 배아 신경 시스템에 액세스할 시각입니다. 12 단계 CNS의 배아 밴드 단축을 시작하고 단계 15 일까지 접합면의 확실한 패턴이 달성되었습니다. 단계 17으로 CNS 계약 및 PNS는 완전히 (캄포스 – 오르테가 외. 1985) 개발되고 있습니다. 따라서 PNS와 CNS의 패턴의 변화는 쉽게 이러한 발달 단계 동안 볼 수 있습니다.
Protocol
Discussion
Drosophila의 배아가의 연결을 개발하는 동안 세포와 분자 변화를 조사위한 강력한 시스템입니다. 이 프로토콜에서는 immunohistochemistry에 대한 전체 마운트 배아를 준비하는 방법을 증명하고있다. 우리는 캐롤과 스콧, 1985 년 설명된 프로토콜에서이 프로토콜을 적응있다. 이 프로토콜은 다른 항체의 연결을 테스트하는 적응 될 수 있지만, 항체의 최적화 할 수 있습니다. 또한, 배아 PNS와 CNS의 발…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG는 버팔로의 뉴욕 주립 대학에서와 존 R. Oishei 재단 기금에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
Referências
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biologia do Desenvolvimento. 113, 288-294 (1986).
