Tüm montaj Embriyonik Sinir Sistemi Görselleştirme Drosophila Embriyolar
Summary
Biz sahnelenen hazırlamak için prosedürü tarif<em> Drosophila</em> Embriyogenez sırasında embriyonik sinir sisteminin görünüm için embriyoların.
Abstract
Drosophila embriyo sinirsel gelişimi hücresel ve moleküler temelini araştırmak için çekici bir model sistem. Burada nöronal proteinler antikor kullanarak Drosophila Embriyonik sinir sisteminden görünüm için prosedürü açıklar. Tüm embriyonik periferik sinir ve merkezi sinir sistemi, tek tek hücrelerin (; Bodmer ve ark, 1987; Dambly-Chaudiere ve ark, 1986 Bodmer ve ark, 1989) bu yana, bu sistemleri herhangi bir sapmaları farklı nöronal proteinlere karşı antikorlar kullanarak kolayca tanımlanabilir. Gelişmekte olan embriyolar, embriyoların uygun görünüm için gelişim evreleri olduğundan emin olmak için belirli zamanlarda toplanır. Toplandıktan sonra, embriyonun dış katmanları, koryon zarı ve embriyo çevreleyen vitellin zarf, fiksasyon önce kaldırılır. Embriyolar sonra nöronal antikorlar ile inkübe edildi ve floresan etiketli sekonder antikorlar kullanılarak görüntülendi. Aşamada Embriyolar 12-17 Embriyonik sinir sistemine erişmek için görüntülendi. Evre 12 CNS germ bant kısaltılması başlar ve 15 sahne komissür kesin bir model elde edilmiştir. Evre 17 ile MSS sözleşmeleri ve PNS tamamen geliştirilmiştir (Campos-Ortega ve ark, 1985). Böylece PNS ve MSS desen değişiklikleri kolayca bu gelişim evrelerinde görülebilir.
Protocol
Discussion
Drosophila embriyo nöronal gelişim sırasında hücresel ve moleküler değişiklikler araştırmak için güçlü bir sistem. Bu protokolde immünohistokimya için bütün montaj embriyoların nasıl hazırlanacağını göstermiştir. Biz bu protokolü Carroll ve Scott, 1985 yılında açıklanan protokol adapte var. Bu protokol aynı zamanda diğer nöronal antikor testi için adapte olabilir, ancak antikorlar optimizasyonu yapılmalıdır. Ayrıca, embriyonik PNS ve merkezi sinir sistemi gelişim kusurlar…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG, Buffalo New York Devlet Üniversitesi ve John R. Oishei Vakfı fonları tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
Referências
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biologia do Desenvolvimento. 113, 288-294 (1986).
