La visualisation du système nerveux embryonnaire, en totalité montage Drosophile Embryons
Summary
Nous décrivons la procédure pour préparer scène<em> Drosophile</em> Embryons pour la visualisation du système nerveux embryonnaire, lors de l'embryogenèse.
Abstract
L'embryon de drosophile est un système modèle intéressant pour étudier les bases cellulaires et moléculaires du développement neuronal. Nous décrivons ici la procédure pour la visualisation de la drosophile embryonnaire du système nerveux en utilisant des anticorps dirigés contre les protéines neuronales. Depuis la toute embryonnaire nerveux périphérique et le système nerveux central sont bien caractérisés au niveau des cellules individuelles (Dambly-Chaudière et al, 1986;.. Bodmer et al, 1987;. Bodmer et al, 1989), les aberrations de ces systèmes peuvent être facilement identifiés à l'aide des anticorps contre différentes protéines neuronales. Les embryons en développement sont collectées à certains moments afin de s'assurer que les embryons sont au stade de développement approprié pour la visualisation. Après la collecte, les couches externes de l'embryon, la membrane chorion et l'enveloppe vitelline qui entoure l'embryon, sont enlevés avant la fixation. Les embryons sont ensuite incubés avec des anticorps neuronale et visualisés en utilisant des anticorps marqués par fluorescence secondaire. Les embryons à des stades de 12 à 17 sont visualisés pour accéder au système embryonnaire nerveux. Au stade 12 la bande de germe de SNC commence le shortening et par l'étape 15 du modèle définitif de la commissure a été atteint. Au stade 17 les contrats SNC et le SNP est entièrement développé (Campos-Ortega et al. 1985). Ainsi, les variations dans la structure de la SNP et du SNC peuvent être facilement observés au cours de ces stades de développement.
Protocol
Discussion
L'embryon de drosophile est un système puissant pour étudier les modifications cellulaires et moléculaires au cours du développement neuronal. Dans ce protocole, nous avons démontré comment préparer embryons monter ensemble pour l'immunohistochimie. Nous avons adapté ce protocole à partir du protocole décrit dans Carroll et Scott, 1985. Ce protocole peut également être adapté pour tester d'autres anticorps neuronale, mais l'optimisation des anticorps devrait être fait. De plus, des…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG est soutenu par des fonds de l'Université d'État de New York à Buffalo et de la Fondation John R. Oishei.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
Referências
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Biologia do Desenvolvimento. 113, 288-294 (1986).
