La somministrazione orale di Rotenone utilizzando un Gavage e Image Analysis di alfa-sinucleina inclusioni nel sistema nervoso enterico
Summary
Morbo di Parkinson è stata correlata all'esposizione ai pesticidi. Qui vi mostriamo un metodo per fornire pesticidi utilizzando un tubo gastrico alla concentrazione desiderata e un metodo per analizzare il loro effetto in alfa-sinucleina accumulo nel sistema nervoso enterico.
Abstract
Nella malattia di Parkinson (PD) pazienti, la patologia associata segue un modello caratteristico che coinvolge tra l'altro il sistema nervoso enterico (ENS) 1,2, il bulbo olfattivo (OB), il nucleo motore dorsale del vago (DMV) 3, l'intermedio- nucleo dei 4 midollo spinale e la substantia nigra, fornendo la base per la messa in scena neuropatologici della malattia 4,5. L'ENS e l'OB sono le strutture più esposte nervoso e le prime ad essere colpite. È interessante notare che PD è stata correlata ai pesticidi 6-8. Qui vi mostriamo nel dettaglio due metodi utilizzati nel nostro studio precedente 9. Per analizzare gli effetti del rotenone agire localmente sulle ENS, abbiamo somministrato rotenone utilizzando una sonda gastrica per un anno vecchio C57/BL6 topi. Rotenone è un pesticida largamente usato che inibisce fortemente complesso mitocondriale I 10. E 'altamente lipofile e scarsamente assorbito nel tratto gastrointestinale 11. I nostri risultati hanno mostrato che la somministrazione di 5 mg / kg di rotenone non ha inibito l'attività Complesso I mitocondriale nel muscolo o del cervello. Così, suggerendo che usando il nostro metodo di rotenone amministrazione non ha attraversato il sistema epatoportale e agiva esclusivamente sulla ENS. Qui vi mostriamo un metodo di amministrare con una sonda gastrica pesticidi e il protocollo di analisi delle immagini utilizzate per analizzare gli effetti del pesticida in alfa-sinucleina accumulo nel ENS. La prima parte illustra un metodo che consente la somministrazione intragastrica di pesticidi (rotenone) ad una concentrazione desiderata precisa. Il secondo metodo mostra una semi-automatica protocollo di analisi delle immagini per analizzare alfa-sinucleina accumulo nel ENS utilizzando un software di analisi dell'immagine.
Protocol
Discussion
Amministrazione intragastrica è stato precedentemente effettuato 12. Tuttavia, secondo il manoscritto Inden, il rotenone è stato somministrato sciolto in carbossimetilcellulosa sale dello 0,5% di sodio (CMSS) da solo. Rotenone è una sostanza ad alta liphophylic. Pertanto, rotenone non può essere sciolto in 0,5% CMSS da solo e si precipitano se fatto così. L'uso del cloroformio crea una sospensione rotenone distribuito uniformemente evitando precipitazioni. Inoltre, a causa della maggiore concentrazio…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Pedro Barrie de la Maza Fondazione ha sostenuto questo lavoro.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotenone | SIGMA-Aldrich | R8875 | Germany | |
| Chloroform | Carl Roth | 3313.1 | Germany | |
| Carboxymethylcellulose | SIGMA-Aldrich | C5678 | Germany | |
| Gavage 1,2 mm x 60 mm | Unimed | Switzerland | ||
| LSM 510 | Zeiss Microscopes | |||
| FIJI | http://pacific.mpi-cbg.de |
Referências
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