Die orale Verabreichung von Rotenon mit einem Gavage und Bildanalyse von Alpha-Synuclein Einschlüsse in den enterischen Nervensystem
Summary
Parkinson-Krankheit ist die Exposition gegenüber Pestiziden in Zusammenhang gebracht. Hier zeigen wir eine Methode, um Pestizide mit einer Magensonde in der gewünschten Konzentration und eine Methode, um ihre Wirkung in alpha-Synuclein Anreicherung zu analysieren, die enterale Nervensystem liefern.
Abstract
In der Parkinson-Krankheit (PD)-Patienten, folgt der damit verbundenen Pathologie ein charakteristisches Muster mit unter anderem die enterale Nervensystem (ENS) 1,2, der Riechkolben (OB), der Nucleus dorsalis des Vagus (DMV) 3, die intermediolateralen Kern des Rückenmarks 4 und der Substantia nigra, die die Grundlage für die neuropathologischen Inszenierung der Krankheit 4,5. Die ENS und der OB sind die am stärksten exponierten Nerven Strukturen und die ersten, die betroffen sein. Interessanterweise hat PD um Pestizidbelastung 6-8 in Verbindung gebracht. Hier zeigen wir im Detail zwei Methoden in unserer vorherigen Studie 9 verwendet. Um die Effekte von Rotenon lokal handeln auf der ENS zu analysieren, wir Rotenon mit einer Magensonde zur einjährigen C57/BL6-Mäusen verwaltet. Rotenon ist eine weit verbreitete Pestizid, das stark hemmt mitochondrialen Komplex I 10. Es ist sehr lipophilen und schlecht im Magen-Darm-Trakt 11 absorbiert. Unsere Ergebnisse zeigten, dass die Gabe von 5 mg / kg Rotenon nicht hemmen mitochondrialen Komplex I-Aktivität in den Muskeln oder dem Gehirn. So, was darauf hindeutet, dass die Verwendung unserer Verwaltung Methode Rotenon nicht über die hepatoportal und war ausschließlich auf die ENS tätig. Hier zeigen wir eine Methode, um Pestizide mit Hilfe eines Magensonde und die Bildanalyse-Protokoll verwendet, um die Auswirkungen des Pestizids in alpha-Synuclein Anreicherung in der ENS analysieren zu verwalten. Der erste Teil zeigt eine Methode, intragastrische Verabreichung von Pestiziden (Rotenon) ermöglicht bei einer gewünschten genaue Konzentration. Die zweite Methode ist eine semi-automatische Bildanalyse-Protokoll zu alpha-Synuclein Anreicherung in der ENS analysieren mit Hilfe eines Bildanalyse-Software.
Protocol
Discussion
Intragastric Verwaltung wurde bereits 12 durchgeführt. Doch nach Inden Manuskript, Rotenon verabreicht wurde in 0,5% Carboxymethylcellulose-Natriumsalz (CMSS) allein aufgelöst. Rotenon ist ein High liphophylic Substanz. Daher kann Rotenon nicht in 0,5% CMSS aufgelöst allein sein und Niederschlag, wenn getan. Der Einsatz von Chloroform entsteht eine gleichmäßig verteilte Rotenon Federung vermeiden Niederschlag. Außerdem wird durch den höheren Konzentrationen des Pestizids in der CMSS ist das endgültige…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Pedro Barrie de la Maza-Stiftung unterstützt diese Arbeit.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotenone | SIGMA-Aldrich | R8875 | Germany | |
| Chloroform | Carl Roth | 3313.1 | Germany | |
| Carboxymethylcellulose | SIGMA-Aldrich | C5678 | Germany | |
| Gavage 1,2 mm x 60 mm | Unimed | Switzerland | ||
| LSM 510 | Zeiss Microscopes | |||
| FIJI | http://pacific.mpi-cbg.de |
Referências
- Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, . Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner’s and Auerbach’s plexuses in cases staged for Parkinson’s disease-related brain pathology. Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).
- Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. Parkinson’s disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system. Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).
- Wakabayashi, K. Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism. J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).
- Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. Parkinson’s disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons. Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).
- Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. Stages in the development of Parkinson’s disease-related pathology. Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).
- Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. The risk of Parkinson’s disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living. Neurology. 50, 1346-1350 (1998).
- Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. Parkinson’s disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals. Neurology. 42, 1328-1335 (1992).
- Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. Environmental antecedents of young-onset Parkinson’s disease. Neurology. 43, 1150-1158 (1993).
- Pan-Montojo, F. Progression of Parkinson’s disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice. PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).
- Sherer, T. B. Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson’s disease. J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).
- Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. Toxin-induced models of Parkinson’s disease. NeuroRx. 2, 484-494 (2005).
- Inden, M. Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone. J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).
