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Extracción de microtúbulos modificados de células de mamíferos para estudiar complejos microtúbulos-proteínas mediante microscopía crioelectrónica
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Extracting Modified Microtubules from Mammalian Cells to Study Microtubule-Protein Complexes by Cryo-Electron Microscopy
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Extracción de microtúbulos modificados de células de mamíferos para estudiar complejos microtúbulos-proteínas mediante microscopía crioelectrónica

DOI:
10.3791/65126-v

•

08:02 min

•

March 03, 2023

•

, , ,
1Oncode Institute and Division of Biochemistry,Netherlands Cancer Institute

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:43Cell Culture and Harvesting
  • 01:30Microtubule Extraction
  • 04:13Cryo-Electron Microscopy (EM) Grid Preparation
  • 06:16Results: Analyzing Microtubule-Protein Complexes
  • 07:34Conclusion

Summary

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Aquí, describimos un protocolo para extraer tubulina endógena de células de mamíferos, que pueden carecer o contener enzimas modificadoras de microtúbulos específicas, para obtener microtúbulos enriquecidos para una modificación específica. Luego describimos cómo los microtúbulos extraídos se pueden decorar con proteínas purificadas de unión a microtúbulos para preparar rejillas para la microscopía crioelectrónica.

Tags

MicrotubuleCryo-EMMicrotubule-protein ComplexesPost-translational ModificationsCell CultureHCT116 CellsCell LysisUltracentrifugationMicrotubule PolymerizationPaclitaxel

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