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Estrazione di microtubuli modificati da cellule di mammifero per studiare complessi microtubulo-proteine mediante microscopia crioelettronica
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Extracting Modified Microtubules from Mammalian Cells to Study Microtubule-Protein Complexes by Cryo-Electron Microscopy

Estrazione di microtubuli modificati da cellule di mammifero per studiare complessi microtubulo-proteine mediante microscopia crioelettronica

DOI:

08:02 min

March 03, 2023

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Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:43Cell Culture and Harvesting
  • 01:30Microtubule Extraction
  • 04:13Cryo-Electron Microscopy (EM) Grid Preparation
  • 06:16Results: Analyzing Microtubule-Protein Complexes
  • 07:34Conclusion

Summary

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Qui, descriviamo un protocollo per estrarre la tubulina endogena da cellule di mammifero, che possono mancare o contenere specifici enzimi modificanti i microtubuli, per ottenere microtubuli arricchiti per una specifica modifica. Descriviamo quindi come i microtubuli estratti possono essere decorati con proteine purificate che legano i microtubuli per preparare griglie per la microscopia crioelettronica.

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