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Extraction de microtubules modifiés de cellules de mammifères pour étudier les complexes microtubule-protéine par cryomicroscopie électronique
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Extracting Modified Microtubules from Mammalian Cells to Study Microtubule-Protein Complexes by Cryo-Electron Microscopy
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Extraction de microtubules modifiés de cellules de mammifères pour étudier les complexes microtubule-protéine par cryomicroscopie électronique

DOI:
10.3791/65126-v

•

08:02 min

•

March 03, 2023

•

, , ,
1Oncode Institute and Division of Biochemistry,Netherlands Cancer Institute

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:43Cell Culture and Harvesting
  • 01:30Microtubule Extraction
  • 04:13Cryo-Electron Microscopy (EM) Grid Preparation
  • 06:16Results: Analyzing Microtubule-Protein Complexes
  • 07:34Conclusion

Summary

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Ici, nous décrivons un protocole pour extraire la tubuline endogène de cellules de mammifères, qui peuvent manquer ou contenir des enzymes modificateurs de microtubules spécifiques, pour obtenir des microtubules enrichis pour une modification spécifique. Nous décrivons ensuite comment les microtubules extraits peuvent être décorés avec des protéines purifiées de liaison aux microtubules pour préparer des grilles pour la cryo-microscopie électronique.

Tags

MicrotubuleCryo-EMMicrotubule-protein ComplexesPost-translational ModificationsCell CultureHCT116 CellsCell LysisUltracentrifugationMicrotubule PolymerizationPaclitaxel

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