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यूकेरियोटिक कोशिकाओं से ट्रांसलेशनल कॉम्प्लेक्स के वीवो फिक्सेशन और अलगाव में तेजी
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Rapid In Vivo Fixation and Isolation of Translational Complexes from Eukaryotic Cells
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यूकेरियोटिक कोशिकाओं से ट्रांसलेशनल कॉम्प्लेक्स के वीवो फिक्सेशन और अलगाव में तेजी

DOI:
10.3791/62639-v

•

14:29 min

•

December 25, 2021

•

, , , , ,
1Division of Genome Sciences and Cancer, The John Curtin School of Medical Research,The Australian National University, 2Centre for Advanced Microscopy,The Australian National University, 3Victor Chang Cardiac Research Institute

Chapters

  • 00:10Introduction
  • 01:06Yeast Cell Culture and FIxation
  • 03:58Yeast Cell Disruption and Cytosol Collection
  • 05:45Mammalian Cell Culture and Fixation
  • 09:40Mammalian Cell Disruption and Cytosol Collection
  • 11:02Results
  • 13:41Conclusion

Summary

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हम लाइव खमीर और स्तनधारी कोशिकाओं में फॉर्मलडिहाइड क्रॉसलिंकिंग के साथ ट्रांसलेशनल (प्रोटीन बायोसिंथेसिस) परिसरों को तेजी से स्थिर करने के लिए एक तकनीक पेश करते हैं। यह दृष्टिकोण क्षणिक मध्यवर्ती और गतिशील आरएनए: प्रोटीन इंटरैक्शन को विच्छेदन करने में सक्षम बनाता है। क्रॉसलिंक किए गए परिसरों का उपयोग कई डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों में किया जा सकता है जैसे कि गहरे अनुक्रमण-आधारित प्रोफाइलिंग विधियों, माइक्रोस्कोपी और मास-स्पेक्ट्रोमेट्री में।

Tags

In Vivo FixationTranslational ComplexesEukaryotic CellsRapid ChillingFormaldehyde FixationGlycine QuenchingCell LysisRibosomal FractionsAffinity PurificationRNA AnalysisMass SpectrometryYeast CultureExponential Growth PhaseFormaldehyde ConcentrationFixation TimeCell PelletingGlycine Buffer

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