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Etikettenfreier Immunpräzipitations-Massenspektrometrie-Workflow für großangelegtes Nuklear-Interactome-Profiling
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JoVE 신문 생화학
Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling
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Etikettenfreier Immunpräzipitations-Massenspektrometrie-Workflow für großangelegtes Nuklear-Interactome-Profiling

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11:19 min

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November 17, 2019

DOI:

10.3791/60432-v

DOI:
10.3791/60432-v

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11:19 min
November 17, 2019

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1Department of Molecular, Cellular and Developmental Biology,University of Colorado, 2Linda Crnic Institute for Down Syndrome,University of Colorado School of Medicine

Summary

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Described ist ein Proteomik-Workflow zur Identifizierung von Proteininteraktionspartnern aus einer nuklearen subzellulären Fraktion mithilfe der Immunaffinitätsanreicherung eines bestimmten Proteins von Interesse und der etikettenfreien Massenspektrometrie. Der Workflow umfasst subzelluläre Fraktionierung, Immunpräzipitation, filtergestützte Probenvorbereitung, Offline-Bereinigung, Massenspektrometrie und eine nachgelagerte Bioinformatik-Pipeline.

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Label-freeImmunoprecipitationMass SpectrometryNuclear InteractomeProtein-protein InteractionsSubcellular FractionationAffinity PurificationProteomics WorkflowCell LysisNuclear LysateDounce Homogenization

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Guard, S. E., Ebmeier, C. C., Old, W. M. Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling. J. Vis. Exp. (153), e60432, doi:10.3791/60432 (2019).

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