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Haute sensibilité mesure des affinités de liaison de l’ADN-facteur de Transcription par titrage concurrentiel à l’aide de la microscopie en Fluorescence
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy
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Haute sensibilité mesure des affinités de liaison de l’ADN-facteur de Transcription par titrage concurrentiel à l’aide de la microscopie en Fluorescence

DOI:
10.3791/58763-v

•

06:38 min

•

February 07, 2019

•

, , , ,
1Gene Center and Department of Biochemistry, Center for Protein Science Munich (CIPSM),Ludwig-Maximilians-Universität München

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:00Oligomer Annealing
  • 01:45Gel Preparation
  • 03:35Addition of the Competitor DNA Solution and Image Acquisition
  • 04:41Competitive Titration Assay and the Fitting Procedure
  • 05:17Results: Determining TF-DNA Binding Affinities Using Fluorescence Microscopy
  • 06:07Conclusion

Summary

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Nous présentons ici une nouvelle méthode permettant de déterminer les affinités de liaison à l’équilibre et en solution avec la sensibilité élevée sur une grande échelle. Cela permet d’améliorer l’analyse quantitative de liaison ADN-facteur de transcription. La méthode repose sur des mesures d’anisotropie fluorescence automatisé dans un système de livraison contrôlé.

Tags

Transcription Factor-DNA BindingFluorescence MicroscopyDissociation ConstantCompetitive TitrationAnisotropy MeasurementBinding AffinityProtein-DNA InteractionDNA AnnealingAgarose GelTitration PlateCalibration WellNile Blue Dye

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