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荧光显微镜竞争滴定法测定转录机-dna 结合感的高灵敏度
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문
생화학
High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy
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Click here for the English version.
荧光显微镜竞争滴定法测定转录机-dna 结合感的高灵敏度
DOI:
10.3791/58763-v
•
06:38 min
•
February 07, 2019
•
Christophe Jung
,
Max Schnepf
,
Peter Bandilla
,
Ulrich Unnerstall
,
Ulrike Gaul
1
Gene Center and Department of Biochemistry, Center for Protein Science Munich (CIPSM)
,
Ludwig-Maximilians-Universität München
Chapters
00:04
Title
01:00
Oligomer Annealing
01:45
Gel Preparation
03:35
Addition of the Competitor DNA Solution and Image Acquisition
04:41
Competitive Titration Assay and the Fitting Procedure
05:17
Results: Determining TF-DNA Binding Affinities Using Fluorescence Microscopy
06:07
Conclusion
Summary
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在这里, 我们提出了一种新的方法来确定结合亲和力的平衡和解决具有高灵敏度的大尺度。这改进了转录因子-dna 结合的定量分析。该方法基于控制下的输送系统中的自动荧光各向异性测量。
Tags
Transcription Factor-DNA Binding
Fluorescence Microscopy
Dissociation Constant
Competitive Titration
Anisotropy Measurement
Binding Affinity
Protein-DNA Interaction
DNA Annealing
Agarose Gel
Titration Plate
Calibration Well
Nile Blue Dye
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