Bu video, immunoperoksidaz tahlil olarak bilinen bir enzimatik antijen algılama tekniği kullanılarak virüslerin tespit edilmesi ve titering için alternatif bir yöntem gösteriyor. Burada, biz, nasıl virüs örnekleri toplamak için size göstermek için test hücreleri hazırlamak ve viral titresi belirlemek için seri dilüsyonları kullanarak nihayet immunoperoksidaz tahlil olacak.
Abstract
Bulaşıcı viral titreleri Hesaplama virologlar için bir temel ve temel deneysel bir yaklaşımı temsil ediyor. Klasik plak Testler insan coronavirüs (HCoV) suşları 229E ve OC43 durumda önemli sitopatik etkileri, yol açmazlar virüsler için kullanılamaz. Bu virüslerin saptanması ve titrasyonu için bir alternatif dolaylı immunoperoksidaz assay (IPA) burada açıklanmıştır. Duyarlı hücreler 96 plaka örnekleri seri logaritmik dilüsyonları inoküle. IPA virüs tespiti viral büyüme sonra, bulaşıcı bir virüs titresi, "Doku Kültürü Bulaşıcı Doz" (TCID50) olarak ifade verir. Bu, bir dizi laboratuar kuyuların yarısının kopyalayan virüs içeren bir virüs içeren bir örnek seyreltme temsil eder. Bu teknik, biyolojik örnekler HCoV titrasyonu (hücre, doku veya sıvıları) için güvenilir bir yöntem.
Protocol
Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur Springer Protokolleri .
Lambert, F., Jacomy, H., Marceau, G., J. Talbot, P. Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. J. Vis. Exp. (14), e751, doi:10.3791/751 (2008).