광견병 간접 형광 항체 검사를 이용한 광견병 IgG 및 IgM 항체 검출
Summary
이 원고의 목적은 광견병 특이적 IgG 및 IgM 항체 검출을 위한 광견병 간접 형광 항체 검사의 사용을 조사하는 것입니다.
Abstract
광견병 간접 형광 항체(IFA) 검사는 혈청 또는 뇌척수액에서 다양한 광견병 특이적 항체 동형을 검출하기 위해 개발되었습니다. 이 검사는 빠른 결과를 제공하며 여러 가지 시나리오에서 광견병 항체를 검출하는 데 사용할 수 있습니다. 광견병 IFA 검사는 광견병이 발병한 환자의 면역 반응을 평가하기 위한 항체를 빠르고 조기에 발견하는 데 특히 유용합니다. 광견병 사전 진단을 위한 다른 방법이 우선하지만, 이 검사는 항체 검출을 통해 최근의 광견병 바이러스 노출을 입증하는 데 활용될 수 있습니다. IFA 검사는 바이러스 중화 항체(VNA) 역가를 제공하지 않지만, 노출 전 예방(PrEP) 반응은 양성 또는 음성 항체 존재를 통해 평가할 수 있습니다. 이 테스트는 다양한 상황에서 활용될 수 있으며 다양한 대상에 대한 결과를 제공할 수 있습니다. 이 연구에서 우리는 PrEP를 투여받은 개인의 여러 쌍을 이루는 혈청 샘플을 사용하고 IFA 테스트를 사용하여 시간이 지남에 따라 광견병 항체의 존재를 입증했습니다.
Introduction
광견병 간접 형광 항체(IFA) 검사는 혈청 또는 뇌척수액에서 다양한 광견병 특이적 항체 동형을 검출하는 데 사용됩니다. 그것은 부검 전 광견병 환자를 모니터링하는 데 사용할 수 있는 다양한 검사 중 하나입니다. 광견병 감염에 대한 환자의 면역 반응을 평가하기 위해 항체를 조기에 발견하는 데 특히 유용합니다. 다른 검사, 증례 기록 및 환자의 백신 접종 상태와 함께 사용할 경우, IFA 검사는 광견병 바이러스 또는 백신에 대한 노출을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다1. IFA 검사는 IgM 및/또는 IgG를 측정하기 때문에 특정 항체의 값은 항원1에 노출된 시점의 대략적인 기간을 나타낼 수 있습니다. 이 테스트는 나열된 응용 프로그램이나 아직 탐색되지 않은 다른 응용 프로그램에서 유용할 수 있습니다.
몇 가지 광견병 혈청학적 분석이 있습니다. 신속 형광 초점 억제 검사(RFFIT), 형광 항체 바이러스 중화 검사(FAVN) 검사 또는 이들의 변형은 광견병 바이러스 중화 항체(RVNA)를 측정하는 주요 방법입니다1. 그러나 이러한 검사는 IgM 항체와 IgG 항체를 구별하지 않습니다. 광견병 면역 반응을 모니터링하는 데 항체 동형을 구별하는 것이 중요한 경우 광견병 IFA 및 광견병 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA) 검사가 사용되지만 RVNA를 측정하지는 않습니다. IFA 및 ELISA 검사는 샘플에서 광견병 특이 항체의 존재를 확인하는 데 사용할 수 있지만 실행 방법에는 몇 가지 차이점이 있습니다. IFA 검사는 세포 배양 살아있는 바이러스를 항원 기질로 사용하는 반면, 광견병 검출을 위한 일반적인 ELISA는 하나 이상의 바이러스 단백질을 사용합니다. 광견병 바이러스를 배양할 수 있는 실험실 환경에서, ELISA를 위한 개별 바이러스 단백질을 구매하거나 배양하는 대신 IFA 테스트를 더 쉽게 수행할 수 있습니다. 검사 목적과 광견병 혈청학적 분석 결과에서 얻은 정보는 어떤 것을 선택할지 결정할 때 고려해야 합니다2.
IgM이 가장 먼저 반응하며, 약 28일째에 클래스 전환이 관찰될 때까지 증가하며, 이 시점에서 IgG가 우세한 순환 항체가 됩니다3. 따라서 IgM은 광견병 바이러스에 노출되거나 백신 접종을 받은 후 제한된 시간 동안만 나타날 수 있습니다. 혈청과 뇌척수액(CSF)을 모두 검사하면 혈청에서만 항체가 나타나는 백신 접종을 통해 노출되었는지 아니면 뇌척수액1에서 항체가 나타날 수 있는 바이러스 감염으로 인한 것인지 알 수 있습니다.
광견병 항체는 노출 전 예방(PrEP) 후 몇 년 동안 지속되는 것으로 확인되었습니다4. IFA 테스트는 백신 접종 또는 노출 후 다양한 시점에서 이를 입증하는 유용한 도구가 될 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
IFA 검사는 항원-항체 복합체를 이용하여 표지 부위에서 광견병 특이적 항체를 시각화할 수 있습니다. 신경모세포종 또는 BHK 세포를 멀티웰 PTFE 코팅 현미경 슬라이드에 파종하고 광견병 바이러스 실험실 균주 CVS-11을 접종합니다. 단층이 합류하고 세포가 약 50%의 원하는 감염도에 도달하면 슬라이드를 사용할 준비가 될 때까지 보관합니다6.
환자 혈청 또는 CS…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 프로젝트를 지원해 주신 뉴욕주 보건부 워즈워스 센터(Wadsworth Center)에 감사드립니다.
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
References
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516 (2021).
- Zajac, M. D. Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera. Viruses. , 40-49 (2019).
- Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis. Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).
- Ramakrishnan, M. A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).
- Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies. Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).
- Fooks, A. R., Jackson, A. C. . Rabies: scientific basis of the disease and its management. , (2020).
- Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).
- Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives. Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).
- Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. Immunological aspects of rabies: a literature review. Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).
- Moore, S. M., Hanlon, C. A. Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease. PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).
