Summary

卵殻を使わない孵化による小可塑性の微生物の発生毒性による鳥胚発生への影響

Published: August 14, 2021
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Summary

本論文では、マイクロプラスチックなどの粒子汚染物質の毒物学的研究に卵殻を用いずに孵化する方法を紹介する。

Abstract

マイクロプラスチックは、動物組織や臓器の取り込みと転座のために動物に大きな健康上の脅威をもたらす新興の世界的な汚染物質タイプです。小プラスチックが鳥の胚の発達に及ぼす生態毒性学的影響は知られていない。鳥の卵は完全な発達と栄養システムであり、胚の発達全体が卵殻で起こります。したがって、マイクロプラスチックなどの汚染物質のストレス下での鳥の胚発生の直接的な記録は、従来の孵化における不透明な卵殻によって非常に制限される。本研究では、マイクロプラスチックがウズラ胚の発達に及ぼす影響を、卵殻を使わずに孵化することによって視覚的に監視した。主なステップは、受精卵の洗浄および消毒、暴露前のインキュベーション、暴露後の短期インキュベーション、およびサンプル抽出を含む。結果は、対照群と比較して、マイクロプラスチック暴露群の湿重量および体長が統計的差を示し、露出群全体の肝臓割合が有意に増加したことを示す。また、温度、湿度、卵の回転角度など、インキュベーションに影響を与える外部要因を評価しました。この実験方法は、マイクロプラスチックの生態毒性学に関する貴重な情報と、胚の発達に及ぼす汚染物質の悪影響を研究する新しい方法を提供する。

Introduction

2015年のプラスチック廃棄物の生産量は約6300山で、その10分の1はリサイクルされ、残りは焼失または地下に埋もれた。2050年までに約12,000山のプラスチック廃棄物が地下に埋もれ、2050までに地下に埋もれ、と推定されている。国際社会がプラスチック廃棄物に注目して、トンプソンは2004年2月にマイクロプラスチックの概念を最初に提案した。マイクロプラスチック(MP)とは、粒子径が5mm未満の小さな粒子プラスチックを指します。現在、研究者たちは、様々な大陸、大西洋諸島、内陸湖、北極、深海の生息地3、4、5、6、7の海岸線におけるMPのユビキタスな存在検出しました。したがって、より多くの研究者がMPの環境上の危険を研究し始めています。

生物は環境中でMPを摂取することができます。世界中の233の海洋生物(100%のカメ種、36%のアザラシ種、59%のクジラ種、59%の海鳥種、92種類の海魚、6種類の無脊椎動物を含む)の消化管でMPが見つかりました8。さらに、MPは生物の消化器系をブロックし、蓄積し、彼らのボビー9に移動する可能性があります。MPは食物連鎖を介して移動することができ、その摂取量は生息地、成長段階、摂食習慣、食料源10の変化と異なることを発見した。一部の研究者は、海鳥11の滴にMPの存在を報告しました, これは海鳥がMPのキャリアとして機能することを意味します.さらに、MPの摂取は、いくつかの生物の健康に影響を与える可能性があります。例えば、MPは消化管に絡み合い、したがって鯨類12の死亡率を増加させることができる。

MPだけでも、他の汚染物質との生物に対する共同毒性効果と同様に、生物に毒性効果があります。プラスチックデブリの環境関連濃度の摂取は、成魚13の内分泌系機能を乱す可能性がある。マイクロプラスチックのサイズは、生物による取り込みと蓄積に影響を与える重要な要因の1つです 14,15.小型プラスチック、特にナノサイズのプラスチックは、毒性の高い細胞や生物との相互作用を起こしやすい16,17,18,19.ナノ粒子サイズマイクロプラスチックが生物に及ぼす有害な影響は現在の研究レベルを超えていますが、数マイクロメートル未満のマイクロプラスチック、特に環境中のサブミクロン/ナノプラスチックの検出と定量は依然として大きな課題です。さらに、ナノプラスチックは胚にもいくつかの影響を及ぼす。ポリスチレンは、タンパク質および遺伝子プロファイル20を調節することによってウニ胚の発達を損なう可能性がある。

MPが生物に及ぼす潜在的な影響を調べるには、この研究を実施しました。鳥の胚とヒト胚の類似性のために、それらは通常、血管新生および抗血管新生、組織工学、生体材料インプラント、および脳腫瘍22、23、24を含む発生生物学研究21で使用される。鳥の胚は、低コスト、短い培養サイクルと簡単な操作25、26の利点を有する。そこで、今回の実験動物として、短い成長サイクルを有するウズラ胚を選んだ。同時に、卵殻を含まない孵化技術を用いて、胚発生段階でMPに曝露されたウズラ胚の形態学的変化を直接観察することができる。使用した実験材料は、ポリプロピレン(PP)およびポリスチレン(PS)であった。PPおよびPS27は、世界中の堆積物および水域で得られるポリマータイプの割合が最も高いため、捕獲された海洋生物から抽出される最も一般的なポリマータイプはエチレンおよびプロピレン28である。この実験プロトコルは、MPに曝露されたウズラ胚に対するMPの毒物学的影響を視覚的に評価するための全プロセスを記述する。この方法を簡単に拡張して、他の排卵動物の胚発生に対する他の汚染物質の毒性を調べることができます。

Protocol

1. 暴露前の準備 同じ日に生まれた受精ウズラの卵を選択して、暴露試験を行います。 同じような重みを持つウズラの卵を選択します。各受精ウズラの卵は約10〜12gです。 外的な便および他の破片からすべての受精したウズラの卵を完全にきれいにしなさい。 各孵化前の受精ウズラの卵と使用する卵(同様の殻の形をした卵、特に卵の先端を選ぶ)を抗生物質溶液(…

Representative Results

実験データの解析では、湿重量、体長、胸骨長、対照群と6つの実験群との間の肝細胞学的指標の変化を比較し、ウズラ胚の成長と発達をマクロの観点から測定し、反映した。我々は、各群で6つの正常なウズラ胚を検出した。各胚は必要なハンバーガーとハミルトン(HH)の段階に達した。 図1では、孵化前の受精ウズラの卵の内容物を半球卵殻に移し?…

Discussion

本論文は、基礎的な開発指標を検出することによってウズラ胚の発生を評価するための効果的な実験スキームを提供する。しかし、この実験にはまだいくつかの制限があります。

まず、殻のない孵化のために、孵化の後の段階におけるウズラ胚の死亡率が高くなる。実験過程での正常タンパク質比の破壊など、人為的に制御不能な因子があります。実験の正確性を確保?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この研究は、新疆ウイグル自治区の主要な研究開発プロジェクト(2017B03014、2017B03014-1、2017B03014-2、2017B03014-3)によって支援されました。

Materials

 Multi sample tissue grinder Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd. Tissuelyser-24 Grind large-sized plastics into small-sized ones at low temperature
Electronic balance OHAUS corporation PR Series Precision Used for weighing
Fertilized quail eggs Guangzhou Cangmu Agricultural Development Co., Ltd. Quail eggs for hatching without shell
Fluorescent polypropylene particles Foshan Juliang Optical Material Co., Ltd. Types of plastics selected for the experiment
Incubator Shandong, Bangda Incubation Equipment Co., Ltd. 264 pc Provide a place for embryo growth and development
Nanometer-scale polystyrene microspheres Xi’an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. 100 nm, 200 nm, 500 nm Types of plastics selected for the experiment
Steel ruler Deli Group 20 cm Used to measure  length
Vertical heating pressure steam sterilizer Shanghai Shenan Medical Instrument Factory LDZM-80KCS-II Sterilize the experimental articles

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Cite This Article
Wang, L., Xue, N., Li, W., Wufuer, R., Zhang, D. Ecotoxicological Effects of Microplastics on Bird Embryo Development by Hatching without Eggshell. J. Vis. Exp. (174), e61696, doi:10.3791/61696 (2021).

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