在伊蚊中传播微孢子寄生虫Edhazardia aedis

1. 第 0 天 将 1升（DI） 水放入幼虫饲养托盘中，将蛋类蛋与 E.aedis 感染。加入50毫克的鱼食。注：在出版时 ，E.aedis的实验室 菌株只能从积极研究寄生虫的实验室获得， 因为E.aedis 不能长期储存，受感染的卵子目前不储存在储存库中。有兴趣与 E.aedis合作的研究人员 可以联系相应的作者，请求受感染的卵子。注：通常不需要孵化大量受感染的鸡蛋; 10个E.aedis 感染的 E.aegypti 幼虫足以给1000≥剂量。注：对于本协议的所有部分，我们在以下条件下安置蚊子：14 小时/10 小时光/暗循环、27 °C 温度和 80% 相对湿度。 2. 第 1 天 孵化后，将幼虫密度降低至每托盘+100幼虫，必要时制作新托盘（也用1升DI水）。 在每个托盘中加入一块干猫粮。耗尽食物后补充食物，但不提供过量的食物。每三天一块猫粮（约200毫克）就足够了。注：根据特定的饲养条件调整食物量（即，如果水变得浑浊或幼虫死亡，减少食物;如果幼虫发育严重延迟，则减少食物）。可以使用此处建议的其他喂养方案和/或饲养条件，但可能需要调整此标准协议的时间安排。 3. 第 4 天\u20125 当受感染的幼虫是3~4星时，在一个新的托盘中孵化出健康/未受感染的Ee.aegypti卵子。 后方的密度， 使健康的 Ae. aegypti 达到2 + 3第 三星在 48 – 72 小时。在我们手中，这可以通过密度200\u2012300幼虫每1升水与 副利比 图姆获得食物。多日孵化一批健康卵子可以保证幼虫在需要的时候处于正确的阶段。 4. 第 7 天\u20128： 水平传输 注：在感染幼虫中，在单核孢子数量高（1 x 104 = 1 x 106 6，每个幼虫）中，不能对健康的幼虫进行对健康的幼虫的给给。这发生在第4星阶段的后期（图2）。 收获和量化单核孢子。 使用转移移液器（可能需要将尖端切到更宽的直径）将 10 个受感染的幼虫移动到 1.5 mL 微离心管。 用转移移液去除育种水，加入±1 mL的清洁DI水洗一次。用移液去除洗涤水，在10个幼虫中加入500μL的清洁DI水，并使用害虫和机械均质器均质化。 使用血细胞计以 400 倍的放大倍率量化孢子。注：核糖孢子可以通过其独特的火种形状（即梨形）来识别;图2A）。 剂量 健康 Ae. aegypti 幼虫与 E. aedis. 混合1.2克肝粉、0.8克啤酒酵母和100 mL水，制作新鲜的幼虫食品浆料。注：如果食物被自动保存并储存在4°C，直到使用，就不需要新鲜。 将 1002 – 3第 3 个星健康 Ae. aegypti 幼虫转移到 150 mL 烧杯或标本杯中。 剂量每个烧杯100幼虫与5 x 104 × 1 x 105 孢子。 将 2 mL 的幼虫食物浆料和 DI 水加入到 100 mL 的最终体积中。 在12~24小时暴露后，按照标准的饲养方案16将暴露的幼虫转移到饲养托盘和成年后。 5. 监测和垂直传输 监测被点幼虫的幼崽，并在它们发育到笼子里出现杯时，将幼虫转移到它们。糖饲料成人广告（根据16，17）。与成人接触的成人将被感染。 血液喂养成人（根据16，17）和收集鸡蛋。E. aedis 的垂直传输在此步骤中发生。注：如果一旦卵巢完成就提供额外的血餐，女性在成人遭受（通常是突然）高死亡率之前，至少可以多产一组卵子。 使用这些 感染 E. aedis 的 Ae. aegypti 卵子 ，从本协议的第 1 步开始继续繁殖。注：鸡蛋在适当条件下可储存2~3个月。 用 10% 漂白剂和高压灭灭（如果可能）清洁所有与 E. aedis 接触的材料，以防止污染。