Summary

Высокочастотная ультразвуковая эхокардиография для оценки сердечной функции зебры

Published: March 12, 2020
doi:

Summary

Мы описываем протокол для оценки морфологии сердца и функции у взрослых зебры с помощью высокочастотной эхокардиографии. Метод позволяет визуализировать сердце и последующую количественную оценку функциональных параметров, таких как частота сердечных приступов (HR), выход сердца (CO), изменение дробной области (FAC), фракция выброса (EF), а также скорость притока крови и оттока.

Abstract

Зебрафиш(Danio rerio) стал очень популярным модельным организмом в сердечно-сосудистых исследованиях, включая сердечные заболевания человека, во многом благодаря своей эмбриональной прозрачности, генетической уступчивости и удобствам для быстрых, высокопроизводительных исследований. Однако потеря прозрачности ограничивает анализ функций сердца на взрослой стадии, что усложняет моделирование возрастных заболеваний сердца. Для преодоления таких ограничений, высокочастотная ультразвуковая эхокардиография у зебры становится жизнеспособным вариантом. Здесь мы представляем подробный протокол для оценки сердечной функции у взрослых зебры с помощью неинвазивной эхокардиографии с помощью высокочастотного ультразвука. Метод позволяет визуализировать и анализировать измерение сердца зебры и количественно ежемерскую оценку важных функциональных параметров, включая частоту сердечных приступов, объем инсульта, выход сердца и выброс фракции. В этом методе, рыбы под обезглавлены и хранятся под водой и могут быть восстановлены после процедуры. Хотя высокочастотный ультразвук является дорогостоящей технологией, одиниковую платформу визуализации можно использовать для различных видов (например, мурина и зебры) путем адаптации различных преобразователей. Эхокардиография зебры является надежным методом сердечного фенотипирования, полезным для проверки и характеристики моделей заболеваний, особенно позднего начала заболеваний; экраны наркотиков; и исследования сердечно-сотруднических травм, восстановления и регенеративной способности.

Introduction

Зебрафиш(Danio rerio) является устоявшейся позвоночной моделью для изучения процессов развития и заболеваний человека1. Зебрафиш обладают высоким генетическим сходством с человеком (70%), генетической усваиваемостью, высокой плодовитостью и оптической прозрачностью во время эмбрионального развития, что позволяет прямо проводить визуальный анализ органов и тканей, в том числе сердца. Несмотря на наличие только одного предсердия и одного желудочка, сердце зебры(рисунок 1) физиологически похоже на четырехкамерные сердца млекопитающих. Важно отметить, что частота сердечных приступов зебры, морфология электрокардиограммы и потенциальная форма действия напоминают формы людей больше, чем виды мурин2. Эти особенности сделали зебрафиш отличной моделью для сердечно-сосудистых исследований и обеспечили основные идеи в сердечное развитие3,4, регенерация5, и патологические условия1,,3,4, в том числе атеросклероз, кардиомиопатии, аритмии, врожденные пороки сердца, и амилоидный свет сердечной токсичности1,43,6. Оценка сердечной функции стала возможной на эмбриональной стадии (1-дневное послеоплодное) путем прямого видеоанализа с использованием высокоскоростной видеомикроскопии7,,8. Тем не менее, зебрафиш теряют прозрачность за эмбриональной стадии, ограничивая функциональные оценки нормальных зрелых сердец и поздних сердечных заболеваний. Чтобы преодолеть это ограничение, эхокардиография была успешно использована в качестве высокого разрешения, в режиме реального времени, неинвазивные альтернативы изображений для оценки функции сердца зебры взрослых9,10,11,12,13,14,15.

У зебры сердце расположено венцомально в грудной полости сразу же застежки с предсердием, расположенным в дорсе к желудочку. Атриум собирает венозную кровь из синусовой веносики и передает ее в желудочек, где он далее перекачивается в артериоз пулезного(рисунок 1). Здесь мы описываем физиологический, подводный протокол для оценки сердечной функции у взрослых зебры с помощью неинвазивной эхокардиографии с помощью линейного ультразвукового зонда с центральной частотой 50 МГц для Визуализации B-режима с разрешением 30 мкм. Так как ультразвуковые волны могут легко путешествовать через воду, сохраняя близость между рыбой и сканирующий зонд под водой обеспечивает достаточную контактную поверхность для обнаружения сердца без необходимости для ультразвукового геля и в целом менее напряженным для рыбы. Хотя альтернативные системы эхокардиографии зебры были зарегистрированы несколькими авторами9,12,13, здесь мы представляем общие и наиболее часто используемые установки, которая применяется к высокочастотной ультразвука у животных.

Метод позволяет с высоким разрешением изображения сердца взрослого зебры, отслеживание сердечных структур, а также количественное измерение пиковых скоростей от измерений кровотока доплеров. Мы показываем надежную виво-количественную оценку важных систолических и диастолических параметров, таких как фракция выброса (EF), изменение дробной области (FAC), скорость притока и оттока желудочков, частота сердечных приступов (HR) и сердечный выброс (CO). Мы вносим свой вклад в создание надежного диапазона нормальных здоровых взрослых зебры сердечных функциональных и размерных параметров, чтобы позволить более точное обследование патологических состояний. В целом, мы предоставляем надежный метод для оценки сердечной функции у зебры, которая оказалась чрезвычайно полезной в создании и проверке моделей болезни сердца зебры6,16, травмы сердца и восстановления10,13, и регенерации11,12, и может быть дополнительно использован для оценки потенциальных препаратов.

Protocol

Все процедуры, связанные с зебрафишами, были одобрены нашим Институциональным Комитетом по уходу за животными и эксплуатации и соответствуют Закону о защите животных Министерства сельского хозяйства США. 1. Экспериментальная настройка Настройка платформы дл?…

Representative Results

Описанный протокол позволяет измерять важные сердечные мерные и функциональные параметры, аналогичные технике, используемой в эхокардиографии человека и животных. B-Mode изображения позволяют отслеживания желудочковой внутренней стенки в систолы и диастолы<strong class="xfi…

Discussion

Мы описываем систематический метод эхокардиографической визуализации и оценки сердечной функции у взрослых зебры. Эхокардиография является единственным доступным неинвазивным и наиболее надежным методом для живой взрослой рыбы сердечной визуализации и функционального анализа, и о…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Мы благодарим Фреда Робертса за техническую поддержку и пересмотр рукописи.

Materials

Double sided tape
Fish net
Glass container – 100 inch high
High frequency transducer Fujifilm/VisualSonics MX700 Band width 29-71 MHz, Centre transmit 50 MHz, Axial resolution 30 µm
Plastic teaspoon
Scalpel or scissors
Small fish tanks
Sponge (kitchen sponge)
Transfer pipets (graduated 3 mL) Samco Scientific 212
Tricaine (MS-222) Sigma-Aldrich A5040
Vevo 3100 Imaging system and imaging station Fujifilm/VisualSonics
Vevo LAB sofware v 1.7.1 Fujifilm/VisualSonics

References

  1. Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! Modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).
  2. Verkerk, A. O., Remme, C. A. Zebrafish: a novel research tool for cardiac (patho)electrophysiology and ion channel disorders. Frontiers in Physiology. 3, 255 (2012).
  3. Bakkers, J. Zebrafish as a model to study cardiac development and human cardiac disease. Cardiovascular research. 91 (2), 279-288 (2011).
  4. Poon, K. L., Brand, T. The zebrafish model system in cardiovascular research: A tiny fish with mighty prospects. Global Cardiology Science and Practise. 2013 (1), 9-28 (2013).
  5. Jopling, C., et al. Zebrafish heart regeneration occurs by cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation. Nature. 464 (7288), 606-609 (2010).
  6. Mishra, S., et al. Zebrafish model of amyloid light chain cardiotoxicity: regeneration versus degeneration. American Journal of Physiology Heart Circulatory Physiology. 316 (5), H1158-H1166 (2019).
  7. Shin, J. T., Pomerantsev, E. V., Mably, J. D., MacRae, C. A. High-resolution cardiovascular function confirms functional orthology of myocardial contractility pathways in zebrafish. Physiologycal Genomics. 42 (2), 300-309 (2010).
  8. Mishra, S., et al. Human amyloidogenic light chain proteins result in cardiac dysfunction, cell death, and early mortality in zebrafish. American Journal of Physiology Heart Circulatory Physiology. 305 (1), H95-H103 (2013).
  9. Ernens, I., Lumley, A. I., Devaux, Y., Wagner, D. R. Use of Coronary Ultrasound Imaging to Evaluate Ventricular Function in Adult Zebrafish. Zebrafish. 13 (6), 477-480 (2016).
  10. González-Rosa, J. M., et al. Use of Echocardiography Reveals Reestablishment of Ventricular Pumping Efficiency and Partial Ventricular Wall Motion Recovery upon Ventricular Cryoinjury in the Zebrafish. PLoS One. 9 (12), (2014).
  11. Huang, C. C., Su, T. H., Shih, C. C. High-resolution tissue Doppler imaging of the zebrafish heart during its regeneration. Zebrafish. 12 (1), 48-57 (2015).
  12. Kang, B. J., et al. High-frequency dual mode pulsed wave Doppler imaging for monitoring the functional regeneration of adult zebrafish hearts. Journal of the Royal Society Interface. 12 (103), (2015).
  13. Lee, J., et al. Hemodynamics and ventricular function in a zebrafish model of injury and repair. Zebrafish. 11 (5), 447-454 (2014).
  14. Sun, L., Lien, C. L., Xu, X., Shung, K. K. In Vivo Cardiac Imaging of Adult Zebrafish Using High Frequency Ultrasound (45-75 MHz). Ultrasound in Medicine and Biology. 34 (1), 31-39 (2008).
  15. Wang, L. W., Kesteven, S. H., Huttner, I. G., Feneley, M. P., Fatkin, D. High-Frequency Echocardiography- Transformative Clinical and Research Applications in Humans, Mice, and Zebrafish. Circulation Journal. 82 (3), 620-628 (2018).
  16. Wang, L. W., et al. Standardized echocardiographic assessment of cardiac function in normal adult zebrafish and heart disease models. Disease Models & Mechanisms. 10 (1), 63 (2017).
  17. Lee, L., et al. Functional Assessment of Cardiac Responses of Adult Zebrafish (Danio rerio) to Acute and Chronic Temperature Change Using High-Resolution Echocardiography. PLOS ONE. 11 (1), e0145163 (2016).
  18. Genge, C. E., et al., Nilius, B., et al. . Reviews of Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 171, 99-136 (2016).

Play Video

Cite This Article
Evangelisti, A., Schimmel, K., Joshi, S., Shah, K., Fisch, S., Alexander, K. M., Liao, R., Morgado, I. High-Frequency Ultrasound Echocardiography to Assess Zebrafish Cardiac Function. J. Vis. Exp. (157), e60976, doi:10.3791/60976 (2020).

View Video