本文介绍了评估皮洛卡平诱导癫痫小鼠记忆损伤的实验程序。该协议可用于研究癫痫相关认知衰退的病理生理学机制,这是癫痫最常见的合并症之一。
认知障碍是叶癫痫最常见的合并症之一。为了在癫痫动物模型中重述癫痫相关认知衰退,我们产生了由皮洛卡平治疗的慢性癫痫小鼠。我们使用这些癫痫小鼠为三种不同的行为测试提供了一个协议:新对象位置 (NL)、新对象识别 (NO) 和模式分离 (PS) 测试,分别用于评估地点、对象和上下文的学习和记忆。我们解释了如何在运动场测试后,为NL、NO和PS测试设置行为装置并提供实验程序,该测试测量动物的基底运动活动。我们还描述了NL、NO和PS测试在评估癫痫小鼠记忆功能的其他行为测试方面的技术优势。最后,我们讨论了癫痫小鼠在熟悉会话期间未能与物体进行良好接触的可能原因和解决方案,这是成功进行记忆测试的关键步骤。因此,该协议提供了有关如何使用小鼠评估癫痫相关记忆损伤的详细信息。NL、NO 和 PS 测试简单、高效的检测,适用于评估癫痫小鼠中不同类型的记忆。
癫痫是一种慢性疾病,其特征是自发性复发性发作11、2、3。2,3由于重复性癫痫发作可引起大脑11、2、32,3的结构和功能异常,异常发作活动可引起认知功能障碍,这是最常见的癫痫相关合并症4,4、5、6。,6与慢性癫痫发作事件相反,这些发作是短暂的和短暂的,认知障碍会持续到癫痫患者的生活中,从而恶化他们的生活质量。因此,了解癫痫相关认知衰退的病理生理学机制非常重要。
各种癫痫实验动物模型被用来证明与慢性癫痫相关的学习和记忆缺陷787,8,9,10,11,12。,9,10,11,12,例如,莫里斯水迷宫、上下文恐惧调理、孔板、新型物体位置(NL)和新颖的物体识别(NO)测试经常被用来评估叶癫痫(TLE)的记忆功能障碍。由于海马是TLE显示病理学的主要区域之一,因此通常优先选择能够评估海马依赖记忆功能的行为测试。然而,鉴于癫痫发作可以诱发异常海马神经发生,并促成癫痫相关认知衰退10,测试变性新生儿神经元功能的行为范式(即空间模式分离,PS)8,13也可以提供有关癫痫记忆损伤细胞机制8,13的宝贵信息。
在本文中,我们演示了针对癫痫小鼠的一组内存测试 NL、NO 和 PS。测试简单且易于访问,不需要复杂的系统。
本研究描述了评估慢性癫痫小鼠认知功能的实验程序。许多不同的行为测试范式用于评估小鼠18中的学习和记忆功能。莫里斯水迷宫、径向臂迷宫、Y迷宫、上下文恐惧调节和基于对象的测试是最常用的行为测试,并提供可靠的结果。其中,NL、NO和PS测试是评价癫痫小鼠,8、10学习和记忆的有效、简单的方法。8由于癫痫小鼠在行为过程中…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢李杰敏博士的技术支持。这项工作得到了韩国政府资助的韩国国家研究基金会(NRF-2019R1A2C1003958,NRF-2019K2A9A2A2A08000167)的支持。
1 ml syringe | Sung-shim | Use with the 26 or 30 gauge needle | |
70% Ethanol | Duksan | UN1170 | Spray to clean the box and objects |
black curtain | For avoiding unnecessary visual cues | ||
Cresyl violet | Sigma | C5042 | For Cresyl violet staining |
cryotome | Leica | E21040041 | For tissue sectioning |
double-sided sticky tape | For the firm placement of the objects | ||
DPX mounting medium | Sigma | 06522 | |
ethanol series | Duksan | UN1170 | Make 100%, 95%, 90%, 80%, 70% ethanol solutions |
floor plate with narrow grid patterns | Leehyo-bio | Behavioral experiment equipment, plate size: 42.5 x 42.5 x 0.5 cm, grid size: 2.75 x 2.75 cm | |
floor plate with wide grid patterns | Leehyo-bio | Behavioral experiment equipment, plate size: 42.5 x 42.5 x 0.5 cm, grid size: 5.5 x 5.5 cm | |
illuminometer | TES Electrical Electronic Corp. | 1334A | For the measurement of the room lighting (60 Lux) |
Intensive care unit | Thermocare | #W-1 | |
ketamine hydrochloride | Yuhan | 7003 | Use to anesthetize the mouse for transcardial perfusion |
LED lamp | Lungo | P13A-0422-WW-04 | Lighting for the behavioral test room |
objects | Rubber doll, 50 ml plastic tube, glass Coplin jar, plastic T-flask, glass bottle | ||
open field box | Leehyo-bio | Behavioral experiment equipment, size: 44 x 44 x 31 cm | |
paper towel | Yuhan-Kimberly | 47201 | Use to dry open field box and objects |
paraformaldehyde | Merck Millipore | 104005 | Make 4% solution |
pilocarpine hydrochloride | Sigma | P6503 | |
ruler | Use to locate the objects in the open field box | ||
scopolamine methyl nitrate | Sigma | S2250 | Make 10X stock |
Smart system 3.0 | Panlab | Video tracking system | |
stopwatch | Junso | JS-307 | For the measurement of explorative activities of mice |
sucrose | Sigma | S9378 | For cryoprotection of tissue sections |
terbutaline hemisulfate salt | Sigma | T2528 | Make 10X stock |
video camera (CCD camera) | Vision | VCE56HQ-12 | Place the camera directly overhead of the open field box |
xylazine (Rompun) | Bayer korea | KR10381 | Use to anesthetize the mouse for transcardial perfusion |
xylene | Duksan | UN1307 | For Cresyl violet staining |