外迁移系统中淋巴细胞迁移的评估

这种原始的迁移方法是由斯蒂芬·博伊登于1962年在《实验^{医学杂志1》}上提出的。如果没有博伊登室的发展，我们对化学和化学动力学的了解是不可能实现的。在1977年发现第一个化学药物之前，前体迁移系统被用来了解血清因子，这些血清因子可以阻止巨噬细胞的细胞运动，同时放大中性粒^细胞1、2的细胞活力。关于免疫细胞迁移，已经发展了大量的知识，到目前为止，已经发现了47个化学素与19个相应的^{受体3，4。}此外，这些化学药物通路的多种抑制剂/增强剂已发展为治疗^{目的5，6，7，8。}其中许多化合物已经在类似的迁移室中进行了测试，以了解化合物与免疫细胞对给定化学^素9的反应之间的直接相互作用。

迁移，或二足动物，进入发炎的组织是一个必要的过程，以健康的炎症反应清除^{感染10，11。}博伊登室、迁移系统或跨井装置一般由由多孔^膜1、12隔开的两个腔室组成。底部腔通常装有含有感兴趣的化学素的介质，而白细胞则放置在顶部腔室中。可以根据感兴趣的细胞的大小选择膜中的孔隙大小。对于这个项目，我们选择了3μm多孔膜，因为淋巴细胞的大小是7-20μm，这取决于细胞发育的阶段。这种孔径大小确保这些细胞不会被动地从毛孔中掉落，而是主动迁移以响应化学素梯度。

该协议的主要优点是其成本效益。体内迁移是困难的，因为它需要动物处理和手术方面的广泛培训，并且通常涉及研究人员并不总是可用的高能显微镜。在体内成像之前，可以对被认为能增强或抑制迁移的化合物进行具有成本效益的筛选。由于迁移系统受到严格控制，细胞可以先进行处理，然后添加到转井装置中，反之亦然，可先使用化学抑制剂处理化学药物抑制剂，然后将细胞添加到转井装置中。最后，内皮细胞和/或基底膜蛋白可以在转井实验前1-2天添加到转井插入的底部，以了解这些屏障细胞在化学动力学中的参与程度。同样，这些对系统的操作提供了一种强有力的手段，用于在更复杂的体内研究之前确定有关给定化合物有效性的重要信息。

利用移外室系统是评估淋巴细胞在各种体内和体外条件下的流动性的有效方法12，13，14。在这里，我们描述了一种优化的方法，用于评估外体淋巴细胞对迁移室中化学素的反应。在此示例实验中，CD4⁺ T 细胞和组 2 先天淋巴细胞 （ILC2） 在 OVA 过敏原暴露后从雄性小鼠和雌性 BALB/c 小鼠中分离。生成一个假设，CCR4⁺ CD45⁺系-（LIN-） ILC2 来自过敏原挑战小鼠将比 CCR4 + CD4⁺ T 帮助细胞更有效地迁移到 CCL17 和 CCL22。CCL17和CCL22是一种化学素，通常由M2（过敏）表型的树突细胞和巨噬细胞等细胞产生，在^{过敏15、16}中。CCL17和CCL22可被视为过敏性炎症的生物标志物，因为它们在气道^{恶化16、17、18}期间很容易在肺部检测到。重要的是，CCR4的表达与未经处理的对照组相比是升高的，从从室内尘虫处理动物中分离出的生物信息数据中所揭示，同样，ILC2来自使用IL-33处理的幼化动物的ILC2（过敏原促进先天细胞因子） 上调节 CCR4^19，20.此外，根据免疫基因组项目数据库（www.immgen.org）中的ILC2数据，CCR4 mRNA在这些先天免疫细胞中高度表达。迄今为止，关于将ILC2贩运到组织方面鲜为人知，但ILC2^和CD4+T细胞很可能使用类似的化学素和受体作为化学和化学动力学，因为它们表达类似的转录因子和受体。因此，我们比较了ILC2^和CD4+T淋巴细胞的CCL17与CCL22的响应能力，这些细胞来自男性和女性，OVA挑战动物。