Biópsia e vitrificação humana do Blastocyst

O principal objetivo da embriologia humana moderna é maximizar o número de nascidos vivos por ciclo estimulado e reduzir custos, tempo e esforços para conseguir uma gravidez. Para atingir esse objetivo, devem ser empregadas abordagens validadas para a seleção de embriões para identificar embrião reproductivamente competentes dentro de uma coorte obtida durante um ciclo de FIV. De acordo com as evidências as mais atrasadas, a cultura¹ do blastocisto combinada com o teste cromossomático detalhado e transferência Vitrified-aquecida do embrião do ADN (et) é a estrutura a mais eficiente para aumentar a eficiência²de IVF. Claramente, o teste de aneuploidia requer um espécime embrionário, que presentemente é representado na maior parte de poucas pilhas recuperadas do trofectoderma (te), isto é, a seção do blastocisto que dá a origem aos anexos do embrião (por exemplo, a placenta) durante a gravidez . Além da análise do karyotype, também as únicas mutações genéticas puderam ser avaliadas de uma biópsia do te como parte de uma estratégia clínica conhecida como o teste genético do preimplante (PGT;-a para aneuploidies,-Sr para rearranjos cromossomáticos estruturais,-M para doenças monogênica). Outros métodos da biópsia do oocyte/embrião foram teorized e adotados clìnica através das últimas décadas, a saber biópsia dos corpos polares e biópsia do blastômero. No entanto, a sua utilização é reduzida nos dias de hoje, uma vez que as suas desvantagens processuais (por exemplo, maior carga de trabalho e risco de impacto reprodutivo) e limitações diagnósticas (por exemplo, problemas de análise de células únicas) impedem implicitamente um equilíbrio suficiente entre custos, riscos e benefícios (para uma revisão ver³).

Neste trabalho, um dos principais protocolos para a biópsia TE é completamente descrito juntamente com os procedimentos subsequentes de vitrificação, aquecimento e transferência necessários. O fluxo de trabalho aqui descrito é ideal para uma unidade PGT ocupada.

Como já descrito anteriormente pelo nosso grupo^4,5, o procedimento envolve a abertura sequencial da zona pelúcida de blastocistos totalmente expandidos e remoção de poucas células te (em média 7-8). Comparado ao dia 3 laser-ajudado a incubação-baseou o método⁶da biópsia do blastocisto, este procedimento pôde facilitar a programação diária de uma unidade de IVF onde os procedimentos delicados, tais como a biópsia e a vitrificação do blastocisto, devam ser executados oportuna. Assim que o blastocisto alcança sua expansão cheia, a biópsia pode ser realizada selecionando as pilhas do te a remover, assim impedindo o risco do herniation da massa interna da pilha (ICM), que de outra maneira tornaria o procedimento desafiante. Na literatura, um terceiro Protocolo da biópsia do blastocisto foi descrito igualmente, que envolva o incubação laser-ajudado que está sendo executado uma vez que o embrião já alcangou o estágio do blastocisto, poucas horas antes do procedimento^5,7. Entretanto, esta aproximação é mais demorada e sere principalmente as unidades de IVF que estão implementando a biópsia do te nas mãos de operadores limitadamente experimentados e em vista de uma carga de trabalho diária moderada-baixa.

A injeção intracytoplasmatic do esperma (ICSI)⁸ deve ser uma técnica consolidada se visando conduzir análises genéticas em IVF. Da mesma forma, um sistema de cultura adequado para a colheita segura de embriões para o estágio de blastocist é crucial para a implementação da estratégia de biópsia de TE. Um número adequado de incubadoras, bem como o uso de baixa tensão de oxigênio são pré-requisitos chave para este fim, para não comprometer a taxa de blastocist⁹. Ao mesmo tempo, um programa de criopreservação eficiente é necessário para gerenciar com segurança um ciclo de PGT. Na última década, a implantação da vitrificação impulsionou as taxas de criosobrevivência embrionária até > 99%^10,11. Isso proporcionou tempo suficiente para realizar testes genéticos e adiar a transferência de embriões para o seguinte ciclo menstrual, em um endométrio não estimulado e provavelmente mais receptivo¹².

Tanto a biópsia de TE quanto a vitrificação são tarefas exigentes que exigem habilidades rigorosas e sua eficácia pode variar em operadores não experientes. Um período de formação específico é, portanto, defendido antes de permitir que cada operador realize estes procedimentos clinicamente; Além disso, a manutenção das competências dos operadores deve ser avaliada periodicamente através da monitorização dos indicadores-chave de desempenho (KPI) para os procedimentos de criopreservação e biópsia. Cada clínica de fertilização in vitro deve definir KPIs internos para esse fim, que devem aproximar os publicados por consórcios internacionais e/ou os resultados publicados por laboratórios de referência.

Os procedimentos de biópsia, vitrificação-aquecimento e testemunhando são técnicas validadas em nossa unidade, que foram padronizadas em todos os operadores envolvidos, conforme relatado em três publicações anteriores^11,13,14 .