Gemodificeerde bloedinzameling uit staart aderen van muizen niet-verdoofd met een systeem voor het verzamelen van vacuüm bloed en lenzenvloeistof Vergrootglas
Summary
Deze studie meldt bloedmonsters van staart ader in muizen met behulp van een systeem van de buisjes opzuigen met lenzenvloeistof vergrootglas. Onze methode is makkelijk om te oefenen en kan worden gebruikt voor herhalen bloedmonsters in muizen.
Abstract
Bloed monster collectie is de basis van experimentele dierlijke onderzoek. Het is van belang voor het verkrijgen van voldoende bloedmonsters voor verschillende onderzoeksdoeleinden. De aders van de staart van muizen zijn klein, en het is soms moeilijk te verkrijgen van de vereiste bloed volume door conventionele punctie methoden. Deze studie onderzoekt de superioriteit van herhaalde bloed monster collectie uit staart aderen van muizen door gebruik te maken van een vacuüm bloed collectie systeem en lenzenvloeistof Vergrootglas (experimentele groep) in vergelijking met conventionele bloedmonsters methoden (conventionele groep) , uitgevoerd door beginners als experts, respectievelijk. Met de hulp van een vergrootglas lenzenvloeistof, wordt een vlinder naald tip ingevoegd in de ader van de staart van elke muis in de experimentele groep. Als de ader met succes doorgedrongen is, is een bloedmonster verzameld in de buis vacuüm collectie door invoeging van het einde van de rubber van een vlinder naald in de buis vacuüm bloed collectie. De plunjer wordt vervolgens gebruikt voor het verzamelen van bloed zonder de hulp van de lenzenvloeistof vergrootglas in de conventionele groep. Slagingspercentages van bloed monster collectie door de beginners als experts werden aangetoond dat 70% versus 100% (p < 0,01) in de experimentele groep en 35% versus 85% (p < 0,01) in de conventionele groep. Voor zowel beginners als experts waren punctie tijden vereist voor het verkrijgen van de vereiste bloedmonster beduidend lager in de experimentele groep in vergelijking met de conventionele groep (2,40 ± 0.75 vs. 2.90 ± 0.31, p < 0.05; 1,15 ± 0.37 vs. 1.55 ± 0.76, p < 0,05). Kortom, de gepresenteerde bloed bemonstering techniek is haalbaar en gemakkelijk om te oefenen en frequente bemonstering van voldoende bloed volumes van niet-verdoofd muizen in staat stelt.
Introduction
Bloedmonsters van dieren die betrokken zijn bij experimenten is een fundamenteel onderzoek techniek. Er zijn enkele beschikbare technieken voor bloedinzameling van muizen, inclusief staart knipsels en prikken van het hart, retro-orbitaal plexus halsslagader, caudal ader en vena cava. Idealiter moet bloed worden verzameld in een minimaal invasieve manier, met minimale impact op de gezondheid van het dier. Echter, de meest gebruikte technieken vaak stress bij dieren toebrengen en gevolgen kunnen hebben voor onderzoek resultaten1. De inzameling van het bloed van de retro-orbitaal plexus kan worden gebruikt om genoeg bloed volume van muizen2. Echter, het kan leiden tot ernstige weefselschade en staat niet toe voor het verkrijgen van bloed herhaaldelijk in korte tijd intervallen3.
De caudal ader is een superieure locatie voor bloedinzameling, die minimale schade op muizen toebrengt. Echter de staart aderen van muizen zijn dun, en het is soms moeilijk te verkrijgen van voldoende bloed door de conventionele punctie techniek. In sommige gevallen, herhaalde lekke banden dienen te verkrijgen van het gewenste bloed volume. Anesthesie wordt ook vaak aanbevolen om bloedmonsters uit de aderen van de staart van muizen. Bovendien, een scalpel, richtliniaal scheermes of scherpe schaar kan nodig zijn om de uiteinden van de staarten te verkrijgen van de vereiste bloed monsters4verwijderen. Eerder hebben we succesvol bloedinzameling uit de aderen van de staart van niet-verdoofd ratten gemeld door het vacuüm bloed monster collectie systeem, dat verminderd het risico van besmetting van het bloed en de behoefte aan herhaalde lekke banden5vermeden. Deze studie meldt een soortgelijke bloed collectie methode in muizen niet-verdoofd.
Protocol
Representative Results
Discussion
De huidige studie beschrijft een easy-to-learn bloed collectie methode in muizen die is superieur aan de conventionele technieken. Ten eerste, de methode gemakkelijk kan worden beheerst met een hoog slagingspercentage. Ten tweede, het is gebaseerd op het beginsel van de vacuüm negatieve druk en zorgt voor continue tekening van bloed met een verminderd risico van blootstelling aan direct bloed, dat ook de kans op besmetting en hemolyse9 vermindert. Ten derde, is deze methode haalbaar voor frequente bemonstering van bloed met voldoende volumes van muizen gedurende een korte periode van tijd voor verschillende onderzoeksdoeleinden. Bovendien, de procedure toebrengt alleen minimale schade op muizen en bloedinzameling kan worden uitgevoerd zonder het gebruik van verdoving; Dus, kan de invloed van de stress-respons en de verdoving op bloedmonsters worden vermeden.
De ader van de staart is een superieure locatie voor bloedmonsters volgens het goedgekeurde protocol7. Het is echter niet altijd gemakkelijk te verkrijgen van voldoende bloed volume uit dunne staart aderen met lage bloed stromen. In dit geval, de huid is meestal opengesneden en ader is gepenetreerd door een lancet of het einde van de staart is snel verwijderd door een scheermes.
Dit protocol is gericht op het verbeteren van de methodologie van bloedinzameling van muizen met behulp van het systeem voor het verzamelen van vacuüm bloed, waarvoor een vacuüm bloed collectie monsterbuisje, vlinder naald en lenzenvloeistof vergrootglas. Dit vacuüm bloed bemonsteringssysteem wordt meestal gebruikt voor het verzamelen van bloedmonsters van patiënten in de dagelijkse klinische praktijk10. Met de hulp van een vergrootglas lenzenvloeistof is het punt van de perfecte punctie van een ader van de staart gemakkelijker te vinden. Wanneer het uiteinde van een naald wordt ingevoegd in de ader van de staart, zullen automatisch bloed vloeien in de vacuüm buis als gevolg van negatieve druk. Na de terugtrekking van de naald uit de staart ader, zullen het bloed dat wordt geblokkeerd in de katheter vloeien in de verzamelen vacuüm buis als gevolg van het vacuüm.
De volgende tips zijn belangrijk voor succesvolle toepassing van de methode. Ten eerste moet het lichaamsgewicht voor elke muis 40 g of hogere moeilijkheid in prikken en het verkrijgen van voldoende bloed afnemen. Ten tweede, in het geval van mislukte bloedinzameling, onderzoekers moeten proberen te trekken van de naald langzaam totdat het bloed blijft stromen. Ten derde is het essentieel om uit te breiden van de staart om te voorkomen dat elke beweging tijdens bloedmonsters. Houd de naald voorzichtig kan helpen om de naald-tip in de ader als de bewegingen van de muis staart. Ten vierde, als bloed stroomt stopt uit tijdens de bloedinzameling, de hoek van de naald moet worden aangepast in een tijdige wijze. Om te voorkomen dat de bloedstolling in de naald, een andere punctie positie moet worden geselecteerd als bloed stroomt stopt uit na 15 s. Ten slotte verdient de samenwerking van twee exploitanten tijdens het gebruik van deze techniek voor het verzamelen van bloed van muizen.
Kortom, is de aangenomen vacuüm bloed collectie methode voor gebruik in muizen veilig, haalbaar en makkelijk om te oefenen. Deze methode kan regelmatige bemonstering van bloed met voldoende bloed volumes van niet-verdoofd muizen.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd gesteund door de natuur Science Foundation subsidie van de provincie Hubei, China [Grant No. 2018CFB761].
Materials
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
References
- Grouzmann, E., et al. Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice. European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).
- Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage. Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).
- Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage. Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).
- Hoff, J. Methods of blood collection in the mouse. Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).
