Induksjon av Intestinal Graft - versus - host sykdom og sin Mini-endoskopisk vurdering i levende mus

Blodkreft malignitet direkte som oppstår fra blodkreft stamcelletransplantasjon rommet og ukontrollert, er raskt utvikler seg, og alvorlige immun-mediert lidelser ofte indikasjoner for å utføre allo-HCT^1,2. Selv regnskap for forekomsten av prognostiske gunstig graft-versus-tumor respons, er donor lymfocytter imidlertid ofte inducing og fremme et uønsket immun-mediert angrep sunt vev komponenter i Tillat-HCT mottakeren , en prosess som kalles graft – versus – host sykdom³. Manifestasjoner i tarmen, den såkalte intestinal GvHD, representerer den mest fryktede komplikasjonen av akutt GvHD, alvorlige former som er rutinemessig forbundet med en høy dødelighet^1,2,4.

Samlet, murine modeller av allo-HCT har dukket opp som uvurderlig verktøy for å identifisere og studere immun-mediert mekanismene bak patogenesen av GvHD⁵. Men kinetic vurdering av, for eksempel gunstige effekter av romanen terapeutisk intervensjon over tid i levende mus er rutinemessig basert på fastsettelse av klinisk GvHD score⁶. Mens disse resultatene er egnet til å reflektere, for eksempel generelle sykdom byrden (dvs. systemisk GvHD), klinisk score mangel følsomheten til pålitelig speile organ-spesifikke manifestasjoner (f.eks, i tarmen). Derfor bommer konklusjoner, for eksempel med hensyn til gut-beskyttende effekten av en gitt terapeutisk intervensjon, som er basert på disse scoring systemer vanligvis.

Til tross for store fremskritt gjennom oppfinnelsen av romanen hele kroppen imaging modaliteter i kombinasjon med bruk av enten bioluminescent eller fluorescerende genetisk musen modeller^7,8, metoder til direkte og spesielt vurdere den intestinal manifestasjon av GvHD i levende mus mangler. Derfor er begrunnelsen bak protokollen for endoskopisk vurdering av intestinal GvHD fenotypen beskrevet i neste del å overvinne denne hindringen. Videre motivasjon er også redusere eksperimentelle mus numbers siden, så langt, en detaljert vurdering av mobilnettet morfologiske og molekylære egenskaper (f.eks, av histopatologi eller molekylærbiologi) av intestinal GvHD manifestasjon slutt kreves ofringen av eksperimentelle musen.

Våre institusjon har tidligere rapportert på metoder for en mini-endoskopisk vurdering av colonic manifestasjoner i syngeneic kolitt modeller⁹. I protokollen presenteres her, vi har raffinert og tilpasset den colonoscopic scoret matrise for alloresponse-drevet kolitt i levende mus med intestinal GvHD på transplantasjon av alloreactive HCT og donor lymfocytter i en MHC, klasse jeg fullt feil innstilling . Vi identifisert fire parameterne egnet gjenspeiler tarm GvHD-relaterte colonic lesjoner. Videre etablerte vi en system det innrømmer en finjustert gradering av enhver enkelt determinant, noe som resulterer i en ny poengsum som lett informerer leseren om alvorlighetsgraden av intestinal GvHD i en gitt mus på et gitt tidspunkt. Histopathological analyser bekreftet at en endoskopisk score over en bestemt dørterskel er pålitelig forutsi moderat til høy klasse vev betennelse. Derfor synes mini-endoskopisk evaluering å representere arbeider erstatning for gullstandarden histopatologi som rutinemessig krever ofringen av eksperimentelle musene. Viktigst, denne protokollen kan brukes til nesten enhver tid og kan brukes flere ganger i løpet av sykdommen^10,11. Videre, i motsetning til bruk av bioluminescens-avhengige, ingen arbeid-intens og tidkrevende tiltak som intercrossing genetisk endret mus er nødvendig, og derfor metodikken kan brukes på nesten alle mus-linje interesse.

Til sammen har gitt skadelig klinisk perspektiv allo-HCT pasienter med alvorlig intestinal GvHD, er rask vitenskapelig fremgang og mer innsikt i molekylære mekanismer bak immun patogenesen sterkt behov. Tilsvarende krever viktig, etiske betraktninger at gevinsten av kunnskap skal oppnås med bruk av minimal antall eksperimentelle mus. Derfor anerkjent både krav på forskningen fellesskapet å utforske intestinal GvHD kan være avansert ved å implementere serielle mini-endoskopisk evalueringer av kolon i eksperimentelt arbeid kjeden å overvåke og Vurder intestinal GvHD i live eksperimentelle mus modeller, som beskrevet og validert i protokollen presenteres her.