蛍光光度法による精子膜評価技術

整合性と精子の膜の機能は、精子の生存率と潜在的な受精を示す要因の一部です。細胞膜は、細胞浸透圧平衡¹維持、細胞内と細胞外のコンパートメント間の障壁として機能します。プラズマ膜の完全性への損傷を誘発するストレスが恒常性を損なう、生存率及び受精能力削減および細胞死を増やします。例えば、凍結保存は温度変化と浸透圧ストレス²の結果としてその原形質膜への損傷をによる精子の生存率を低減します。我々 は以前報告公開農薬アトラジン、その主要代謝物 diaminochlorotriazine カビ毒アフラトキシン B1 など食品由来汚染物質の低濃度に雄牛の精液精子生存率^{1,3 を減少させること}.これは、破損した細胞膜と細胞の DNA に結合する PI との組み合わせで DAPI で二本鎖 DNA を標識によって決定されました。

精子先体反応 (AR) は、外側の精子膜と先酵素^4、5の解放に終って覆う膜の融合を含まれます。これらは、透明帯の浸透とさらに⁶卵と精子の結合の重要なイベントです。したがって、先膜の完全性の評価は、精液性状と男性の生殖能力^7,8,9評価に有用なパラメーターを構成します。いくつかの蛍光灯のテクニックは、精子の整合性、FITC PNA または FITC PSA^8,10の検証に適しています。FITC PSA 染色^1,3パターンを使用して私たちの以前の研究で、(i) の正確な定義をそのまま精子提供、(ii) 精子膜を破損しているし、(iii) 精子先体反応します。現在のレポートでは、精子専用フローサイトメトリーを使用して精子の状態を評価し、蛍光顕微鏡を使用して、結果を比較します。

ミトコンドリアは、多機能の細胞小器官で、他のもの、ATP 合成、活性酸素種の生産、カルシウム シグナル伝達とアポトーシスの関与です。生理学的な機能不全、男性と女性の不妊を含む変更されたミトコンドリア機能¹¹に関連付けられます。精子のミトコンドリアは、midpiece に配置され、精子運動¹²で重要な役割を果たします。高のミトコンドリア膜電位 (ΔΨm) は通常の運動性と高い受精能力¹³に関連付けられてそれをよく受け入れられています。対照的に、低 ΔΨm は活性酸素種の高いレベルに関連付けられてし、受精率¹⁴を削減します。それにもかかわらず、様々 な環境物質、例えば内分泌かく乱物質を細胞ストレスを誘発でき、ΔΨm、過分極^1,3フリーラジカルと最終的には、生産の増加の一時的な増加につながるアポトーシス¹⁵。蛍光プローブ 5, 5′, 6, 6′-テトラ-クロロ-1, 1′, 3, 3′-tetraethylbenzimidazolyl carbocyanine ヨウ化 (JC-1) により、たとえば、精子 ΔΨm^1,3食中毒の毒素の影響を調べること。

生理学的および形態学的パラメーターに基づく標準の spermiograms は精液の品質を予測するのに十分ではありません。正確な方法は、精子の質を確保するため必要があります。ここで、精子の膜の評価に基づく精子の質を決定する 2 つの可能な方法を提供: 特定の蛍光プローブと蛍光顕微鏡、私たち研究^1,3に記載されている同時 4 人染色最近既に他のユーザーによって使用されている当研究室において利用される高度な精子専用フローサイトメトリー、^16,17,18。