यहाँ हम डीएनए आधारित वैक्सीन के साथ वयस्क zebrafish (ढाणियो rerio) के प्रतिरक्षण के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं और एक सफल टीकाकरण घटना के सत्यापन का प्रदर्शन करते हैं. यह विधि विभिन्न संक्रमण मॉडलों में वैक्सीन उम्मीदवारों के नैदानिक स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त है ।
पिछले दो दशकों के दौरान डीएनए आधारित टीकाकरण में रुचि बढ़ गई है । डीएनए टीकाकरण एक प्लाज्मिड, जो एक दर्जी और सुरक्षित डिजाइन सक्षम बनाता है में एक चयनित प्रतिजन या एंटीजन का एक संयोजन के अनुक्रम की क्लोनिंग पर आधारित है । मेजबान कोशिकाओं में डीएनए टीके के प्रशासन प्रतिजनों कि दोनों विनोदी और कोशिका मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को उत्तेजित की अभिव्यक्ति की ओर जाता है । यह रिपोर्ट pCMV-EGFP प्लाज्मिड में antigen अनुक्रम की क्लोनिंग के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है, इंट्रामस्क्युलर microinjection द्वारा वैक्सीन उंमीदवारों के साथ वयस्क zebrafish के प्रतिरक्षण, और बाद electroporation सेवन में सुधार करने के लिए । वैक्सीन एंटीजन ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन के रूप में व्यक्त कर रहे हैं (GFP)-फ्यूजन प्रोटीन, जो लाइव मछली से यूवी प्रकाश के तहत प्रतिजन अभिव्यक्ति की पुष्टि और एलिसा के साथ फ्यूजन प्रोटीन के अभिव्यक्ति के स्तर के ठहराव की अनुमति देता है, साथ ही एक पश्चिमी दाग विश्लेषण के साथ उनका पता लगाने । वैक्सीन उम्मीदवारों के सुरक्षात्मक प्रभाव माइकोबैक्टीरियम marinum पांच सप्ताह postvaccination के साथ मछली को संक्रमित द्वारा परीक्षण किया जाता है, qPCR के साथ बैक्टीरिया की ठहराव के बाद चार सप्ताह बाद. स्तनधारी नैदानिक स्क्रीनिंग मॉडल की तुलना में, इस विधि उपंयास डीएनए के प्रारंभिक स्क्रीनिंग के लिए एक लागत प्रभावी विधि एक माइक्रोबैक्टीरियल संक्रमण के खिलाफ टीका उंमीदवारों आधारित प्रदान करता है । विधि को और अधिक विभिन्न जीवाणु और वायरल रोगों के खिलाफ डीएनए आधारित टीके को परखने के लिए लागू किया जा सकता है ।
पहले डीएनए वैक्सीन अध्ययन 1990 के दशक में प्रदर्शन कियागया था, और तब से, डीएनए टीके विभिंन संक्रामक रोगों, कैंसर, प्रतिरक्षा, और एलर्जी2के खिलाफ परीक्षण किया गया है । स्तनधारी, घोड़ों में पश्चिम नील नदी वायरस और कुत्ते मौखिक मेलेनोमा के लिए एक चिकित्सीय कैंसर वैक्सीन के खिलाफ एक डीएनए टीका लाइसेंस प्राप्त किया गया है, लेकिन इन नैदानिक उपयोग2में वर्तमान में नहीं कर रहे हैं । स्तनधारी अध्ययन द्वारा पैदा ब्याज के अलावा, डीएनए टीकाकरण से बाहर कर दिया गया है वायरल रोगों के खिलाफ मछली छुटकारा के लिए एक सुविधाजनक तरीका है । मछली संक्रामक टेम परिगलन वायरस (IHNV) के खिलाफ एक टीका २००५ के बाद से वाणिज्यिक उपयोग में किया गया है, और संक्रामक अग्नाशय परिगलन वायरस (IPNV) के खिलाफ एक टीके हाल ही में3लाइसेंस प्राप्त था । इसके अलावा, मछली रोगजनकों के खिलाफ कई डीएनए टीके विकसित किया जा रहा है ।
के रूप में पारंपरिक टीके अक्सर निष्क्रिय या जीना क्षीणन रोगजनकों होते हैं, वे2रोग संचारित करने का एक संभावित जोखिम मुद्रा । डीएनए टीके, बारी में, इस जोखिम को टालना, के रूप में वे प्लाज्मिड एंकोडिंग बैक्टीरियल या वायरल एंटीजन के प्रशासन पर आधारित हैं, बल्कि पूरे रोगज़नक़ से ही2,4। डीएनए टीके डीएनए पुनर्संयोजन तकनीकों के साथ उत्पादित कर रहे हैं, जो वैक्सीन एंटीजन की सटीक डिजाइन और प्रतिजन संयोजन और adjuvants के लचीला निर्माण एक टीके में5निर्माण की अनुमति देता है । इसके अलावा, डीएनए टीकों के उत्पादन में तेजी से है, आसान और अधिक लागत प्रोटीन की तुलना में कुशल-रिकॉमबिनेंट टीके, जो टीके उंमीदवार स्क्रीनिंग प्रयोजनों के लिए एक प्रमुख लाभ है आधारित है, लेकिन यह भी, उदाहरण के लिए, महामारी फैलने के मामले में 2.
मछली में, डीएनए टीके के लिए सबसे आम प्रशासन मार्गों intraperitoneal, इंट्रामस्क्युलर हैं, और मौखिक3,6,7, जबकि स्तनधारियों में, चमड़े के नीचे और intradermal मार्गों अतिरिक्त विकल्प2हैं । एक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के बाद, administrated डीएनए plasmids प्रशासन साइट पर कोशिकाओं में प्रवेश (जैसे, ज्यादातर myocytes, लेकिन यह भी निवासी प्रतिजन-कोशिकाओं को पेश [APCs]). transfected कोशिकाओं का अनुपात काफी electroporation2,8से बढ़ सकता है । सेल में प्रवेश करने के बाद, कुछ प्लाज्मिड डीएनए नाभिक है, जहां प्लाज्मिड द्वारा इनकोडिंग जीन2प्रतिलिखित रहे है में प्रवेश करती है । इस प्रोटोकॉल में, हम pCMV-EGFP प्लाज्मिड कि एक मजबूत सर्वव्यापी eukaryotic अभिव्यक्ति9के लिए अनुकूलित प्रमोटर है का उपयोग । इस निर्माण में, एंटीजन एक GFP के साथ एक फ्यूजन प्रोटीन के रूप में अनुवाद कर रहे हैं । GFP जीवित मछली में एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के साथ प्रतिजन अभिव्यक्ति के सरल दृश्य द्वारा एक सफल टीकाकरण और सही प्रतिजन उत्पाद की पुष्टि करने के लिए सक्षम बनाता है ।
स्तनधारियों में, डीएनए टीके transfected कोशिका प्रकार2,5के आधार पर प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के विभिंन प्रकार को उत्तेजित करने के लिए दिखाया गया है । Transfected myocytes गुप्त प्रतिजनों extracellular अंतरिक्ष में या उंहें सेल मौत पर रिलीज, और APCs से घिरा एंटीजन हैं, बाद में, प्रमुख histocompatibility परिसर द्वितीय अणुओं2पर प्रस्तुत किया । यह CD4 और सीडी 8 टी सेल प्रतिक्रियाओं, विशेष रूप से, बी सेल प्रतिक्रियाओं के अलावा2,5,10से चलाता है । मछली में, टी और बी लिम्फोसाइटों, साथ ही वृक्ष कोशिकाओं (dc), की पहचान की गई है, अभी तक प्रतिजन प्रस्तुति में परिश्रम के अपने विभाजन कम अच्छी तरह से11समझा है । Zebrafish dc, तथापि, अपने स्तनधारी समकक्षों के साथ12संरक्षित phenotypic और कार्यात्मक विशेषताओं साझा करने के लिए दिखाया गया है । इसके अलावा, डीएनए टीकाकरण मछली में इसी तरह प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं और स्तनधारियों में, टी और बी सेल प्रतिक्रियाएं6,13,14,15,16 सहित, बटोरना दिखाया गया है .
लार्वा और वयस्क zebrafish दोनों ही व्यापक रूप से विभिन्न संक्रामक रोगों के मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जाता है, जैसे कि मछली एम marinum संक्रमण मॉडल इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया तपेदिक के17,18,19,20 ,२१,२२. स्तनधारी मॉडल जीवों के साथ तुलना में, zebrafish के फायदे उनके छोटे आकार, तेजी से reproducibility, और कम आवास खर्च23शामिल हैं । इन पहलुओं zebrafish उपंयास टीकों और दवा यौगिकों23,24,25के लिए बड़े पैमाने पर नैदानिक जांच अध्ययन के लिए एक आदर्श पशु मॉडल बनाते हैं ।
इस प्रोटोकॉल में, हम वर्णन कैसे उपंयास mycobacteriosis के खिलाफ टीका प्रतिजन उंमीदवारों वयस्क zebrafish के डीएनए आधारित टीकाकरण द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है । सबसे पहले, हम वर्णन कैसे एंटीजन pCMV-EGFP अभिव्यक्ति प्लाज्मिड, वैक्सीन plasmids और मांसपेशी में बाद में electroporation के इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल द्वारा पीछा में क्लोन कर रहे हैं । प्रत्येक प्रतिजन की अभिव्यक्ति प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी एक सप्ताह postimmunization द्वारा की पुष्टि की है । antigen उंमीदवारों की प्रभावकारिता तो प्रायोगिक रूप से एम marinumके साथ टीके को संक्रमित द्वारा परीक्षण किया है ।
डीएनए के साथ immunizing वयस्क zebrafish की प्रक्रिया टीकों आधारित कुछ तकनीकी विशेषज्ञता की आवश्यकता है । यहां तक कि एक अनुभवी शोधकर्ता के लिए, टीका लगाने एक मछली लगभग 3 मिनट लेता है, तैयारियों को छोड़कर । इस प्रकार, लगभग १०० मछली की एक अधिकतम एक दिन के भीतर प्रतिरक्षित जा सकता है । यदि प्रयोग के लिए १०० से अधिक मछलियों की आवश्यकता होती है तो प्रतिरक्षण को 3 दिनों के बीच विभाजित किया जा सकता है. प्रयोग की गुणवत्ता के अलावा, मछली से निपटने के लिए शोधकर्ता (ओं) की पर्याप्त प्रशिक्षण और प्रतिरक्षण प्रदर्शन मछलियों की भलाई के लिए आवश्यक है । स्थानीय कानूनी और पशु कल्याण नियमों और दिशा निर्देशों का पालन करने के लिए सुनिश्चित करें कि जब यह मछली आवास की बात आती है, प्रयोगों की योजना बना, और प्रयोगों बाहर ले जाने वाले कर्मियों के लिए आवश्यक योग्यता.
संक्षेप में, प्रतिरक्षण प्रोटोकॉल में जटिलताओं से बचने के लिए कई महत्वपूर्ण कदम हैं । सफल प्रतिरक्षण के लिए, यह सुनिश्चित करें कि 1) मछली प्रतिरक्षित होने के लिए स्वस्थ और आयु और आकार में पर्याप्त है (अधिक किशोर मछली के प्रतिरक्षण नीचे की आवश्यकता कर सकते है वैक्सीन मात्रा स्केलिंग और electroporation सेटिंग्स); 2) मछली ठीक से कोई मजबूत ०.०२% 3-aminobenzoic एसिड एथिल एस्टर के साथ anesthetized हैं, और वे पूरे प्रक्रिया के दौरान anesthetized रहना (संज्ञाहरण के रूप में संभव के रूप में कम रखा जाना चाहिए मछली की वसूली सुनिश्चित करने के लिए); 3) स्पंज पैड ठीक से लथपथ है; 4) तरल वायवीय पंप से प्रत्येक पल्स में इंजेक्शन है और, अगर नहीं, नाड़ी लंबाई (y-अक्ष मदद कर सकते हैं के साथ थोड़ा पीछे सुई खींच) समायोजित किया जाता है; 5) वैक्सीन समाधान के साथ कोई हवाई बुलबुले हैं; 6) electroporation सेटिंग्स और वास्तविक पल्स वोल्टेज और लंबाई सही हैं; 7) इलेक्ट्रोड electroporation साइट पर त्वचा के नुकसान का कारण नहीं है (electroporation के दौरान, मछली के साथ कोमल संपर्क में इलेक्ट्रोड रखने के लिए, और electroporation के बाद वसूली टैंक में तुरंत मछली रिलीज).
यह वसूली टैंक में electroporation के बाद मछली पर नजर रखने के लिए और असुविधा के लक्षण दिखाने के लिए किसी भी मछली euthanize करने के लिए महत्वपूर्ण है । इसके अलावा, यह एक बड़े पैमाने पर प्रयोग शुरू करने से पहले प्रक्रिया का अभ्यास करने के लिए आवश्यक है, एक धाराप्रवाह कार्यप्रवाह सुनिश्चित करने के लिए । यदि संभव हो, सुई और electroporation भरने के साथ सहायता के लिए एक पर्याप्त प्रशिक्षित सहकर्मी से पूछो ।
डीएनए टीकाकरण विधि वैक्सीन एंटीजन की दर्जी निर्मित डिजाइन को सक्षम बनाती है । यह पूरे प्रतिजन क्लोन करने के लिए संभव है या, अधिमानतः, का चयन करें antigen के भागों सेलुलर स्थानीयकरण और immunogenicity24पर आधारित है । इसके अलावा, इस विधि में कई एंटीजन या adjuvants एक टीके का निर्माण या एक ही समय में कई अलग plasmids इंजेक्शन के संयोजन में सक्षम बनाता है2. द्वारा एक बंद codon antigen अनुक्रम के बाद या EGFP जीन प्लाज्मिड से एक्साइज द्वारा सहित, यह भी एक ही प्लाज्मिड वेक्टर का उपयोग करने के लिए संभव है के बाद एन टर्मिनल GFP टैग के बिना प्रतिजन व्यक्त करते हैं । यह सकारात्मक स्क्रीनिंग परिणामों की पुष्टि करने में उचित हो सकता है, GFP के अपेक्षाकृत बड़े आकार के रूप में प्रतिजन की तह को प्रभावित कर सकते हैं और, इस प्रकार, संभावित टीकाकरण द्वारा पैदा की विनोदी प्रतिक्रियाओं को प्रतिबंधित.
एक उच्च प्रतिजन अभिव्यक्ति डीएनए वैक्सीन immunogenicity2से जोड़ा गया है । Electroporation के बाद इंजेक्शन है, इस प्रकार, इस प्रोटोकॉल में शामिल किया गया है, के रूप में यह प्रतिजनों या रिपोर्टर जीन की अभिव्यक्ति में वृद्धि करने के लिए दिखाया गया है चौगुना से दस गुना करने के लिए zebrafish३२में । इसके अलावा, एक तकनीक के रूप में electroporation उदारवादी ऊतक चोट का कारण बनता है, इस प्रकार स्थानीय सूजन उत्प्रेरण कि आगे टीका प्रेरित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं2। दूसरी ओर, electroporation आम तौर पर अच्छी तरह से सहन कर रहा है । उपकरणों के साथ यहां इस्तेमाल किया, व्यावहारिक रूप से वयस्क zebrafish के १००% ४० इस प्रोटोकॉल३५में इस्तेमाल की छह दालों से अच्छी तरह से ठीक हो जाएगा ।
कोशिकाओं में वैक्सीन प्लाज्मिड के प्रवेश को बढ़ाने के लिए electroporation का उपयोग करने के अलावा, हम transfected मछली कोशिकाओं में प्रतिजन अभिव्यक्ति में सुधार करने के लिए प्रतिजन के 3 ‘ अंत में एक मजबूत सर्वव्यापी प्रमोटर वैक्सीन प्लाज्मिड में और एक polyA पूंछ का उपयोग करें । कुछ मामलों में, अगर लक्ष्य रोगज़नक़ के codon उपयोग काफी टीका लगा प्रजातियों से अलग है, codon अनुकूलन आगे बढ़ाने लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति2में उपयोगी पाया गया है । इस zebrafish-M. marinum मॉडल में, हालांकि, codon अनुकूलन दो माइक्रोबैक्टीरियल मॉडल जीन, ESAT-6 और -10 के अभिव्यक्ति स्तर पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव था, और इस प्रकार है, इस मॉडल में अनावश्यक समझा गया है३५ .
लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल एंटीजन के बीच कुछ लौकिक भिन्नता, उदाहरण के लिए, आकार पर और समस्याग्रस्त एंटीजन की संरचना पर निर्भर करता है । हालांकि, antigen अभिव्यक्ति एक ही वैक्सीन के साथ मछली प्रतिरक्षित के एक समूह के भीतर आमतौर पर समान है । आमतौर पर, प्रतिभाशाली EGFP अभिव्यक्ति चार दिनों के एक सप्ताह postvaccination के लिए मनाया जाता है, लेकिन 2 के पैमाने-10 दिन संभव है । यह एक बड़े पैमाने पर प्रयोग में प्रतिजन सहित पहले मछली (2 – 3) के एक छोटे समूह में प्रत्येक प्रतिजन-EGFP फ्यूजन प्रोटीन की अभिव्यक्ति को मान्य करने के लिए सिफारिश की है । यदि कोई GFP अभिव्यक्ति किसी भी बिंदु पर मनाया जाता है 2 – 10 दिनों के बाद प्रतिरक्षण, सुनिश्चित करें कि 1) प्रतिरक्षण प्रोटोकॉल सावधानी से पीछा किया गया था. हमेशा एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में खाली pCMV-EGFP प्लाज्मिड के साथ मछली प्रतिरक्षित के एक समूह है और सुनिश्चित करें कि 2) प्रतिजन डिजाइन और आणविक क्लोनिंग सही ढंग से किया गया था (पर्याप्त प्राइमर डिजाइन; प्रतिजन और EGFP टैग एक ही में दोनों कर रहे हैं पढ़ना फ्रेम और कोई हस्तक्षेप रोक codons शामिल हैं) । कुछ मामलों में, सही antigen डिज़ाइन के बावजूद GFP का पता नहीं लगाया जा सकता । यह फ्यूजन प्रोटीन की गलत तह या तेजी से टूटने के कारण हो सकता है । इन परिस्थितियों में antigen को पुन: डिज़ाइन करने के लिए आवश्यक हो सकता है ।
टीके में है कि farmed मछली छुटकारा के लिए उपयोग किया जाता है, प्लाज्मिड खुराक का इस्तेमाल किया आम तौर पर 1 µ जी या कम7,३३,३४है । zebrafish में रिपोर्टर जीन एक्सप्रेशन के बाद भी पता लगाया जा सकता है कि कम से कम एक ०.५ µ जी प्लाज्मिड इंजेक्शन निम्न electroporation; हालांकि, सापेक्ष लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति काफी प्लाज्मिड प्रति मछली (अनुपूरक आंकड़ा 1) की एक उच्च राशि के साथ बढ़ जाती है । मछली में pCMV के साथ इंजेक्शन-EGFP रिपोर्टर प्लाज्मिड, 5 के साथ एक इंजेक्शन-20 µ जी प्लाज्मिड के परिणामस्वरूप मछली के साथ तुलना में चार से आठ बार उच्च EGFP स्तर ०.५ µ जी के साथ इंजेक्शन इसलिए, एक उच्च पर्याप्त लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति सुनिश्चित करने के लिए, अभी तक इंजेक्शन मात्रा है कि काफी छोटे हैं (≤ 7 µ एल) किसी भी अतिरिक्त ऊतक क्षति या वैक्सीन रिसाव को रोकने के लिए, हम प्रारंभिक स्क्रीनिंग प्रयोजनों के लिए मछली प्रति 5 से 12 µ जी का उपयोग करने के लिए चुना है । वैक्सीन immunogenicity, एक उच्च पर्याप्त लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति के अलावा एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के साथ और पश्चिमी दाग है, जो स्क्रीनिंग के प्रयोजनों के लिए आवश्यक है vivo में सही पुष्टि के साथ रिपोर्टर जीन अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए आवश्यक है लक्ष्य antigen का अनुवाद । हालांकि, कम प्लाज्मिड खुराक (0.5-1 µ g) अन्य प्रकार के प्रायोगिक उपयोगों के लिए उपयोगी हो सकते हैं ।
अंत में, एक डीएनए प्लाज्मिड के साथ वयस्क zebrafish के प्रतिरक्षण के लिए इस प्रोटोकॉल उपंयास वैक्सीन उंमीदवारों के विभिंन जीवाणु या वायरल संक्रमण के खिलाफ नैदानिक परीक्षण में इस्तेमाल किया जा सकता है । एक GFP-फ्यूजन प्रोटीन के रूप में टीका प्रतिजन की अभिव्यक्ति एक सफल प्रतिरक्षण घटना और प्रतिजन अभिव्यक्ति के दृश्य की अनुमति देता है । हम तपेदिक के खिलाफ उपंयास वैक्सीन प्रतिजन उंमीदवारों की नैदानिक जांच के लिए इस विधि लागू होते हैं । इस के लिए, हम zebrafish पांच सप्ताह postvaccination संक्रमित और qPCR20,24के साथ प्रत्येक मछली में जीवाणु गिनती निर्धारित करते हैं ।
The authors have nothing to disclose.
लेखक प्रयोगात्मक इम्यूनोलॉजी अनुसंधान समूह के सदस्यों के लिए आभारी हैं, और विशेष रूप से लीना Mäkinen और Hannaleena Piippo के लिए, सभी काम के लिए वे विकास और टीकाकरण प्रोटोकॉल के अनुकूलन में किया है, और वास्तविक प्रयोगों में उनकी मदद प्रोटोकॉल का उपयोग कर ।
यह काम जेन ja Aatos Erkon Säätiö (जेन और Aatos Erkko फाउंडेशन; टू यूननट), Sigrid Juséliuksen Säätiö (Sigrid Juselius foundation; टू यूननट), हेरा फेरी विश्वविद्यालय के विशेषज्ञ उत्तरदायित्व क्षेत्र के प्रतियोगी राज्य अनुसंधान वित्तपोषण द्वारा समर्थित किया गया अस् पताल (to यूननट), Tampereen Tuberkuloosisäätiö (हेरा क्षयरोग फाउंडेशन; to यूननट, H.M., और M.N.), Suomen Kulttuurirahasto (फिनिश सांस्कृतिक फाउण्डेशन; to H.M.), Suomen Tuberkuloosin Vastustamisyhdistyksen Säätiö (फ़िनिश एंटी तपेदिक फाउंडेशन ते H.M.), Väinö ja लािना Kiven säätiö (Väinö and लािना Kivi foundation; to M.N.) और हेरा फेरी सिटी साइंस फाउंडेशन (to M.N.).
pCMV-GFP plasmid | Addgene | #11153 | |
2-propanol | Sigma-Aldrich | 278475-2L | DNA extraction |
Ampicillin sodium salt | Sigma-Aldrich | A0166-5G | |
Chloroform | Merck | 1.02445.2500 | DNA extraction |
ECM Electro Square Porator | BTX Harvard apparatus | BTX ECM 830 | |
FastPrep-24 5G | MP Biomedicals | 116005500 | homogenizer |
Flaming/brown micropipette puller | Sutter Instrument Co. | P-97 | Pulling of needles |
GeneJet PCR Purification kit | ThermoFischer Scientific | K0701 | |
GFP ELISA kit | Cell Biolabs, Inc. | AKR-121 | |
Guanidine thiocyanate (FW 118.2) | Sigma-Aldrich | G9277-500G | DNA extraction |
ImageJ2 | imagej.net/Downloads | freely available software | |
LB Agar | Sigma | L2897-1kg | |
LB Broth (Miller) | Sigma | L3522-1kg | |
Micromanipulator | Narishige | MA-153 | |
Microscope | Nikon | AZ100 | fluorescense microscope |
Microscope | Olympus | ZS61 | |
Nightsea Full adapter system w/Royal Blue Color light head | Electron Microscopy Sciences | SFA-RB | |
PBS tablets | VWR Chemicals | E404-200TABL. | |
Phenol red sodium salt | Sigma-Aldrich | 114537-5G | |
PV830 Phneumatic Pico Pump | WPI | SYS-PV830 | |
QIAGEN Plasmid Maxi kit | Qiagen | ID:12163 | plasmid extraction |
Sodium citrate (FW294.1) | VWR Chemicals | 27833.294 | DNA extraction |
Tri Reagent | Molecular Research Center, Inc. | TR 118 | DNA extraction |
Tricaine (ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Sigma | A5040-100g | anestesia and euthanasia solution |
Tris (free base) (FW121.14) | VWR Life Science | 0497-500G | DNA extraction |
Tweezertrodes Electrodes (7mm) Kits | BTX Harvard apparatus | BTX 450165 | tweezer type electrodes |
2.8 mmCeramic beads | Omni International | 19-646-3 | DNA extraction |
2ml Tough tubes with caps | Omni International | 19-649 | DNA extraction |
Aluminosilicate capillaries | Harvard apparatus | 30-0108 | |
Microloader 20 µl | eppendorf | 5242956.003 | loading tips |
Petri dishes, 16 mm | Sarsted | 82.1473 | |
Scalpels | Swan Morton | 0501 | |
Parafilm | Bemis | laboratory film | |
Pins | |||
Plastic spoon | |||
Spatula | |||
Sponge | |||
Styrofoam workbench | |||
Tweezers |