Metoder for måling sympatisk og hjerte svar på sentralnervesystemet (CNS) manipulasjoner er viktig for fremme nevrovitenskap. Denne protokollen ble utviklet for å hjelpe forskere med måling og kvantifisere akutte endringer i nyre sympatiske nerve aktivitet (RSNA) i bedøvet rotter (ikke-overlevelse).
Nyre sympatiske nerve aktivitet (RSNA) og mener arteriell press er viktige parametere i hjerte og autonome forskning; men er det begrensede ressurser regi forskere i teknikker for å måle og analysere disse variablene. Denne protokollen beskriver metodene for å måle RSNA og mener arteriell trykket i bedøvet rotter. Protokollen inneholder også tilnærminger for tilgang til hjernen under RSNA innspillinger for sentralnervesystemet (CNS) manipulasjoner. RSNA opptak teknikken er kompatibel med pharmacologic, optogenetic, eller elektrisk stimulering av CNS. Tilnærmingen er nyttig når en etterforsker vil måle kortsiktige (min til h) autonome responsen i ikke-overlevelse eksperimenter å korrelere anatomisk med CNS kjerner. Tilnærmingen er ikke ment å brukes til å få kronisk (overlevelse) innspillinger av RSNA i rotter. Utslipp i RSNA, gjennomsnitt utbedret RSNA, og mener arteriell press kan være kvantifisert og analysert ytterligere ved hjelp av parametriske statistiske tester. Metoder for venøs tilgang, innspilling mener arteriell press telemetrically og hjernen fiksering for fremtidige histologiske analyse er også beskrevet i artikkelen.
Pre-klinisk funn om autonome kontroll av det kardiovaskulære systemet informere strategier for å behandle sykdommer som høyt blodtrykk, hjertesvikt og kronisk nyresykdom. Over-aktivitet i sympatiske nervesystemet og redusert vagal hjerte tone bidra til forhøyet blodtrykk (BP)1. Kronisk opphøyet nyre sympatisk utløp forbedrer katekolaminer sekresjon og reduserer nyre blodstrøm, skadelige konsekvenser hjerte/nyre systemer2,3. Definere nevrobiologiske veier fører til autonome dysfunksjon, er studier i gnagere viktig for å bestemme hvordan sentralnervesystemet (CNS) neurons regulere sympatisk parametere. Formålet med denne protokollen er å gi teknisk informasjon om måling nyre sympatiske nerve aktivitet (RSNA) og BP og skissere teknikkene for å kvantifisere akutt sympatisk endringer i respons til CNS manipulasjoner i bedøvet rotter.
Akutt (ikke-overlevelse) RSNA målinger (varig min til h) er nyttige når forskere vil undersøke CNS farmakologisk, elektrisk, eller optogenetically i anesthetized rotter å bestemme funksjonene til spesifikke kjerner. Ved hjelp av disse metodene, strukturer som enslig kjernen, periaqueductal grå, er pedunculopontine tegmentum og rostral ventrolateral marg gransket for å definere nevrobiologiske trasé regulere sympatisk parametere4, 5,6,7. Denne tilnærmingen er viktig for å identifisere CNS mål undersøkes i kronisk modeller av autonome dysfunksjon8,9. For å fullføre disse eksperimentene, krever laboratoriet en loddebolt, kirurgisk mikroskop, stereotaxic ramme, microelectrode forsterker og lyd skjermen. Avhengig av hvilke faktorer i laboratoriet som bidrar til elektrisk støy, krever kirurgiske/opptak området en Faraday bur/jording stropp å redusere elektrisk støy i RSNA innspillingen. Hvis hjernen analyser krever vev fiksering, kreves perfusjon pumpe og fume hette. Data kan digitaliseres og spilt inn med flere fysiologiske programvare/data oppkjøp (analog-digital omformer) enheter4,5, med forskjellige alternativer og kompatibilitet for omfatter telemetrisk signaler .
Avgjørende skritt for å måle RSNA inkluderer: (1) å unngå strekking av nyre arterien og nerver når skille nyre fra paraspinal muskelen og når å plassere nerve segmentet på opptak elektrodene, (2) nøye dissekere nyre nervefibrene fra omkringliggende vev/fartøyet, (3) sikrer at elektroden ledninger er vev, blod, eller lymfe væske eller (4) hindrer nerve tørker ut ved å bruke mineralolje nyre nerve og silica gel til nerve elektrode enhet. For feilsøking er det viktig å sikre at opptaket systemet er tilstrekk…
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble støttet av National Institute for sykepleie forskning (K99/R00NR014369).
Stainless steel wire | A-M Systems; Sequim, WA | 791000 | RSNA electrode |
Polyethylene (PE-50) tubing | VWR; Radnor, PA | 63019-048 | RSNA electrode; vessel cannulation |
Miniature pin connector | A-M Systems; Sequim, WA | 520200 | RSNA electrode |
Crimping tool | Daniels Manufacturing Corp.; Orlando, FL | M22520 | RSNA electrode |
Connector strip | Amphenol; Clinton Township, MI | 221-2653 | RSNA electrode |
J-B Kwik Epoxy | J-B Weld, Sulphur Springs, TX | 8270 | RSNA electrode |
Silicone | Permatex; Hartford, CT | 2222 | RSNA electrode |
Heparin sodium; Injectable (10 mL vial, 1000 U/mL) | KV Veterinary Supply; David City, NE | P03466 | Venous line patency |
Phenylephrine HCl; Injectable (1 mL vial; 10 mg/mL) | ACE Surgical Supply; Brockton, MA | 950-6312 | Testing renal sympathoinhibition |
Single-hook elastic surgical stays | Harvard Apparatus; Holliston, MA | 72-2595 | Incision |
Silk surgical tape | 3M, Minneapolis, MN | 1538-0 | Secure surgical stays |
Needles, 20 G | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | Z192554-100EA | Vessel cannulation |
Dumont #7 curved forceps | Fine Science Tools; Foster City, CA | 11274-20 | Vessel cannulation |
5-0 silk suture ties | Braintree Scientific; Braintree, MA | SUT-S 106 | Vessel cannulation |
Delicate hemostatic forceps | Roboz Surgical Instrument Co.; Gaithersburg, MD | RS-7117 | Vessel cannulation and RSNA surgery |
Crile Hemostatic forceps | Fine Science Tools; Foster City, CA | 13004-14 | Needle bending |
Telemetry transmitter | Data Sciences International; Minneapolis, MN | PA-10 | Mean arterial pressure monitoring (telemetry) |
Re-gel syringe | Data Sciences International; Minneapolis, MN | 276-0038-001 | Transmitter reuse (telemetry) |
Disposable pressure transducer | Transpac; San Clemente, CA | MI-1224 | Mean arterial pressure monitoring |
Clear-Cuff pressure infuser | MILA International Inc.; Florence, KY | 2281339 | Mean arterial pressure monitoring |
Vessel cannulation forceps | Fine Science Tools; Foster City, CA | 00574-11 | Catheter insertion |
Black monofilament nylon 4-0 suture on reverse cutting needle | McKesson Medical-Surgical; San Francisco, CA | S661GX | Secure telemetry transmitter |
Telemetry receiver | Data Sciences International; Minneapolis, MN | RPC-1 | Mean arterial pressure monitoring (telemetry) |
LabChart Pro (software), PowerLab (acquisition hardware) | AD Instruments; Colorado Springs, CO | ML846, MX2 matrix 2.0 (Compatible with Data Science International telemetry) | 3 options for software/acquisition hardware |
SciWorks (software), DataWave (acquisition hardware) | DataWave Technologies, Loveland, CO | N/A | |
Spike 2 (software), Micro1401-3 | Cambridge Electronic Design Ltd., London UK | 1401-3 | |
Micro-drill | Roboz Surgical Instrument Co.; Gaithersburg, MD | RS-6300 | CNS surgery |
Stereotaxic surgery frame | Stoelting; Wood Dale, IL | 51600 | CNS surgery |
Microelectrode amplifier with 10X pre-amplifier | A-M Systems; Sequim, WA | 1800-2 | RSNA recording |
Retractors | Fine Science Tools; Foster City, CA | 17009-07 | RSNA surgery |
Micro-dissecting tweezers | Fine Science Tools; Foster City, CA | 11251-10 | RSNA surgery |
Micro-hook | Fine Science Tools; Foster City, CA | 10064-14 | RSNA surgery |
Mineral oil | Fisher Scientific; Waltham, MA | 8042-47-5 | RSNA surgery |
Audio monitor | A-M Systems; Sequim, WA | 3300 | RSNA surgery |
Silica gel | Wacker, Munchen; Germany | RT601A-B | RSNA surgery |
Electrical clips | Tyco Electronics; Schaffhausen, Switzerland | EB0283-000 | Grounding or securing perfusion needle |
Bonn scissors, straight/sharp points | Roboz Surgical Instrument Co; Gaithersburg, MD | RS-5840 | Perfusion |
Gavage needle | Harvard Apparatus; Holliston, MA | 75-0286 | Perfusion |
Masterflex perfusion pump | Cole-Parmer; Vernon Hills, IL | 7524-10 | Perfusion |
Masterflex platinum-cured silicone tubing | Cole-Parmer; Vernon Hills, IL | 96410-15 | Perfusion |
Formalin (10% buffered solution; 4 L) | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | HT501128 | Perfusion |
Sucrose | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | S0389 | Cryoprotection |